2009年考博生物化學(xué)與分子生物學(xué)重點(diǎn)十:氨基酸順序分析

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氨基酸順序分析
    蛋白質(zhì)多肽鏈的氨基酸順序分析,即蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定,主要有以下幾個(gè)步驟:
    1. 分離純化蛋白質(zhì),得到一定量的蛋白質(zhì)純品;
    2. 取一定量的樣品進(jìn)行完全水解,再測(cè)定蛋白質(zhì)的氨基酸組成;
    3. 分析蛋白質(zhì)的N-端和C-端氨基酸;
    4. 采用特異性的酶(如胰凝乳蛋白酶)或化學(xué)試劑(如溴化氰)將蛋白質(zhì)處理為若干條肽段;
    5. 分離純化單一肽段;
    6. 測(cè)定各條肽段的氨基酸順序。一般采用Edman降解法,用異硫氰酸苯酯進(jìn)行反應(yīng),將氨基酸降解后,逐一進(jìn)行測(cè)定;
    7. 至少用兩種不同的方法處理蛋白質(zhì),分別得到其肽段的氨基酸順序;
    8. 將兩套不同肽段的氨基酸順序進(jìn)行比較,以獲得完整的蛋白質(zhì)分子的氨基酸順序。