甾體激素類藥物的分析
☆ ☆☆☆考點(diǎn)1：醋酸地塞米松及其制劑的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
醋酸地塞米松屬腎上腺皮質(zhì)激素，其結(jié)構(gòu)如下：
醋酸地塞米松A環(huán)的C1、C2間，C4、C5間各有一個(gè)雙鍵，并與C3上的酮基形成共軛體系，所以有紫外吸收；C17上為α-醇酮基的醋酸酯，α-醇酮基具有還原性；C10、C13具有角甲基，C11上有羥基。
2．鑒別
（1）與堿性酒石酸銅試液的反應(yīng)。皮質(zhì)激素的C17-α-醇酮基具還原性，與斐林試劑反應(yīng)生成橙紅色氧化亞銅沉淀，《中國藥典》據(jù)此對本品進(jìn)行鑒別。
取本品約10mg，加甲醇1ml，微溫溶解后，加熱的堿性酒石酸銅試液1ml，即生成紅色沉淀。
（2）與硫酸的反應(yīng)。本品為甾體激素的醋酸酯，可在堿性條件下先行水解生成醋酸，再于硫酸存在條件下與乙醇發(fā)生酯化反應(yīng)，生成醋酸乙酯，具香氣，可進(jìn)行鑒別。
取本品50mg，加乙醇制成氫氧化鉀試液2ml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加硫酸溶液（1→2）2ml，緩緩煮沸一分鐘，即發(fā)生醋酸乙酯的香氣。
（3）有機(jī)氟化物的反應(yīng)。本品結(jié)構(gòu)中含有氟，照《中國藥典》附錄“一般鑒別試驗(yàn)”中“有機(jī)氟化物”的鑒別方法鑒別。
鑒別方法：取供試品約7mg，用氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液65ml為吸收液，俟燃燒完畢后，振搖使吸收；取吸收液2ml，加茜素氟藍(lán)試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍(lán)紫色。
有機(jī)氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞后，生成F-，在pH4.3的醋酸-醋酸鈉緩沖液中，可與茜素氟藍(lán)試液和Ce3+形成藍(lán)紫色水溶性配合物，以供鑒別。
（4）紅外光譜法?！吨袊幍洹凡捎眉t外光譜法鑒別本品，用溴化鉀壓片，主要的特征峰如下：
《中國藥典》要求，本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜一致。
3．特殊雜質(zhì)檢查
（1）其他甾體。取本品，加氯仿-甲醇（9：1）制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加氯仿-甲醇（9：1）稀釋成每1ml中含0.20mg的溶液，作為對照溶液，進(jìn)行薄層色譜試驗(yàn)。分別取上述兩種溶液各5μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用二氯甲烷-醋酸甲酯-水（100：50：50）的下層液為展開劑，展開后晾干，噴以堿性四氯唑藍(lán)試液。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。
本法為高低濃度對比法，顯色劑四氯唑藍(lán)為氧化劑，常作為皮質(zhì)激素類藥物的顯色劑，四氯唑藍(lán)可被C17上α-醇酮基還原為藍(lán)色甲臘而顯色。
（2）硒。由于本品在合成過程中使用二氯化硒脫氫，硒對人體有劇毒，需進(jìn)行檢查。按《中國藥典》附錄“硒檢查法”檢查。有機(jī)藥物首先經(jīng)氧瓶燃燒破壞，藥物中的硒轉(zhuǎn)變?yōu)镾e6+，在吸收液中加鹽酸羥胺，使Se6+還原為Se4+，在pH2.0的條件下，與2，3-二氨基萘反應(yīng)，生成4，5-苯并苯硒二唑，用環(huán)己烷提取后，于378nm波長處測定吸收度，與對照品比較后測定含量。本品中硒的限度為0.005%。
4．含量測定
（1）醋酸地塞米松的含量測定。采用高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（70：30）為流動(dòng)相；檢測波長為240nm。甲睪酮（0.2mg/ml）作內(nèi)標(biāo)。
測定方法：取醋酸地塞米松對照品約13mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇35ml溶解，用水稀釋到刻度，搖勻；精密量取此溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，置25ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻；取20μl注入色譜儀，記錄色譜圖；另取本品適量，同法測定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算醋酸地塞米松含量。
（2）醋酸地塞米松片的含量測定。采用分光光度法測定片劑的含量。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于醋酸地塞米松7.5mg），置100ml量瓶中，加乙醇75ml，置50～60℃的水浴中保溫10分鐘，并時(shí)時(shí)振搖使樣品溶解，放冷至室溫，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液20ml，置另一100ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，在240nm波長處測定吸收度，按醋酸地塞米松的吸收系數(shù)（E1%1cm）為357計(jì)算含量。
式中，A--測定的吸收度值；W--樣品的稱樣量，g； --平均片重，g。
（3）醋酸地塞米松注射液的含量測定。醋酸地塞米松注射液采用四氮唑比色法測定含量，皮質(zhì)激素類藥物的C17-α-醇酮基具有還原性，在強(qiáng)堿性條件下可以還原四氮唑鹽成有色甲（TTC），從而采用比色法測定含量。氯化三苯四氮唑（TTC），其還原產(chǎn)物為紅色的三苯甲，在485nm處有吸收，常用于皮質(zhì)激素類藥物制劑的含量測定。
測定方法：精密稱取醋酸地塞米松對照品25mg，置100ml量瓶中，加無水乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液；取本品，搖勻，精密量取適量（約相當(dāng)于醋酸地塞米松25mg），置100ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液得供試品溶液；精密量取醋酸地塞米松的對照品溶液和供試品溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液1ml，搖勻，再各精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25℃的暗處放置40～50分鐘，照分光光度法，在485nm波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。
含量測定結(jié)果的計(jì)算公式為：
式中，AX，AR--供試品溶液和對照品溶液的吸收度；CR--對照品溶液的濃度，mg/ml；V--樣品的取樣量，ml。
☆ ☆☆☆考點(diǎn)1：醋酸地塞米松及其制劑的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
醋酸地塞米松屬腎上腺皮質(zhì)激素，其結(jié)構(gòu)如下：
醋酸地塞米松A環(huán)的C1、C2間，C4、C5間各有一個(gè)雙鍵，并與C3上的酮基形成共軛體系，所以有紫外吸收；C17上為α-醇酮基的醋酸酯，α-醇酮基具有還原性；C10、C13具有角甲基，C11上有羥基。
2．鑒別
（1）與堿性酒石酸銅試液的反應(yīng)。皮質(zhì)激素的C17-α-醇酮基具還原性，與斐林試劑反應(yīng)生成橙紅色氧化亞銅沉淀，《中國藥典》據(jù)此對本品進(jìn)行鑒別。
取本品約10mg，加甲醇1ml，微溫溶解后，加熱的堿性酒石酸銅試液1ml，即生成紅色沉淀。
（2）與硫酸的反應(yīng)。本品為甾體激素的醋酸酯，可在堿性條件下先行水解生成醋酸，再于硫酸存在條件下與乙醇發(fā)生酯化反應(yīng)，生成醋酸乙酯，具香氣，可進(jìn)行鑒別。
取本品50mg，加乙醇制成氫氧化鉀試液2ml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加硫酸溶液（1→2）2ml，緩緩煮沸一分鐘，即發(fā)生醋酸乙酯的香氣。
（3）有機(jī)氟化物的反應(yīng)。本品結(jié)構(gòu)中含有氟，照《中國藥典》附錄“一般鑒別試驗(yàn)”中“有機(jī)氟化物”的鑒別方法鑒別。
鑒別方法：取供試品約7mg，用氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液65ml為吸收液，俟燃燒完畢后，振搖使吸收；取吸收液2ml，加茜素氟藍(lán)試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍(lán)紫色。
有機(jī)氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞后，生成F-，在pH4.3的醋酸-醋酸鈉緩沖液中，可與茜素氟藍(lán)試液和Ce3+形成藍(lán)紫色水溶性配合物，以供鑒別。
（4）紅外光譜法?！吨袊幍洹凡捎眉t外光譜法鑒別本品，用溴化鉀壓片，主要的特征峰如下：
《中國藥典》要求，本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜一致。
3．特殊雜質(zhì)檢查
（1）其他甾體。取本品，加氯仿-甲醇（9：1）制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加氯仿-甲醇（9：1）稀釋成每1ml中含0.20mg的溶液，作為對照溶液，進(jìn)行薄層色譜試驗(yàn)。分別取上述兩種溶液各5μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用二氯甲烷-醋酸甲酯-水（100：50：50）的下層液為展開劑，展開后晾干，噴以堿性四氯唑藍(lán)試液。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。
本法為高低濃度對比法，顯色劑四氯唑藍(lán)為氧化劑，常作為皮質(zhì)激素類藥物的顯色劑，四氯唑藍(lán)可被C17上α-醇酮基還原為藍(lán)色甲臘而顯色。
（2）硒。由于本品在合成過程中使用二氯化硒脫氫，硒對人體有劇毒，需進(jìn)行檢查。按《中國藥典》附錄“硒檢查法”檢查。有機(jī)藥物首先經(jīng)氧瓶燃燒破壞，藥物中的硒轉(zhuǎn)變?yōu)镾e6+，在吸收液中加鹽酸羥胺，使Se6+還原為Se4+，在pH2.0的條件下，與2，3-二氨基萘反應(yīng)，生成4，5-苯并苯硒二唑，用環(huán)己烷提取后，于378nm波長處測定吸收度，與對照品比較后測定含量。本品中硒的限度為0.005%。
4．含量測定
（1）醋酸地塞米松的含量測定。采用高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（70：30）為流動(dòng)相；檢測波長為240nm。甲睪酮（0.2mg/ml）作內(nèi)標(biāo)。
測定方法：取醋酸地塞米松對照品約13mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇35ml溶解，用水稀釋到刻度，搖勻；精密量取此溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，置25ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻；取20μl注入色譜儀，記錄色譜圖；另取本品適量，同法測定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算醋酸地塞米松含量。
（2）醋酸地塞米松片的含量測定。采用分光光度法測定片劑的含量。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于醋酸地塞米松7.5mg），置100ml量瓶中，加乙醇75ml，置50～60℃的水浴中保溫10分鐘，并時(shí)時(shí)振搖使樣品溶解，放冷至室溫，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液20ml，置另一100ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，在240nm波長處測定吸收度，按醋酸地塞米松的吸收系數(shù)（E1%1cm）為357計(jì)算含量。
式中，A--測定的吸收度值；W--樣品的稱樣量，g； --平均片重，g。
（3）醋酸地塞米松注射液的含量測定。醋酸地塞米松注射液采用四氮唑比色法測定含量，皮質(zhì)激素類藥物的C17-α-醇酮基具有還原性，在強(qiáng)堿性條件下可以還原四氮唑鹽成有色甲（TTC），從而采用比色法測定含量。氯化三苯四氮唑（TTC），其還原產(chǎn)物為紅色的三苯甲，在485nm處有吸收，常用于皮質(zhì)激素類藥物制劑的含量測定。
測定方法：精密稱取醋酸地塞米松對照品25mg，置100ml量瓶中，加無水乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液；取本品，搖勻，精密量取適量（約相當(dāng)于醋酸地塞米松25mg），置100ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液得供試品溶液；精密量取醋酸地塞米松的對照品溶液和供試品溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液1ml，搖勻，再各精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25℃的暗處放置40～50分鐘，照分光光度法，在485nm波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。
含量測定結(jié)果的計(jì)算公式為：
式中，AX，AR--供試品溶液和對照品溶液的吸收度；CR--對照品溶液的濃度，mg/ml；V--樣品的取樣量，ml。