第一節(jié) 紫外可見分光光度法
一、基本原理醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 收集整理www.med66.com
紫外——可見分光光度法：是根據(jù)物質(zhì)分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法。操作簡單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。
波長長（頻率?。┑墓饩€能量小，波長短（頻率大）的光線能量大。
100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m
通指
X-射線 紫外區(qū) 可見區(qū) 紅外區(qū) 微波區(qū) 無線電波區(qū)
Beer-lambert定律： A=E l c A——吸收度 E-吸收系數(shù) l ——液層厚度 c——溶液濃度
吸收度濃度與厚度的關(guān)系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是單色光。
摩爾吸收系數(shù)：指在一定波長下，溶液濃度為1mol/L ， 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
百分吸收系數(shù)：指在一定波長下，溶液濃度為1%（W/V） ， 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
影響B(tài)eer定律因素：化學(xué)因素，光學(xué)因素
二、紫外——可見分光光度計： 主要部件：醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 收集整理www.med66.com
1、光源：要求光譜的光源，氫燈和鎢燈（350nm）
2、單色器：進(jìn)口狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件（棱鏡和光柵）、聚焦透鏡和出口狹縫組成。
3、吸收池：用光學(xué)玻璃制成的吸收池，只能用于可見光區(qū)。用熔融石英（氧化硅），可見紫外光區(qū)。
4、檢測器：光電池：（硒光電池：用于可見光；硅光電池：紫外可見光） 內(nèi)阻小，易疲勞。
光電管：內(nèi)阻高，電流易放大 .
5、訊號處理和顯示器
三、定性與定量方法醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 收集整理www.med66.com
（一）、定性鑒別：是多數(shù)有機(jī)化合物具有吸收光譜特征。一般用對比法。
1、對比吸收光譜特征數(shù)據(jù)
2、對比吸收度（或吸收系數(shù)）比值
3、對比吸收光譜的一致性
（二）、純度檢查：雜質(zhì)檢查與雜質(zhì)限量檢測
（三）、含量測定：
1、吸收系數(shù)法
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法
3、對照法
第二節(jié) 熒光分析法
熒光分析法：利用熒光的物理特性而進(jìn)行定性與定量測定的方法。熒光法比紫外可見靈敏。
熒光光度計：激發(fā)光源、樣品池、檢測器、濾光片和單色器。
第三節(jié) 紅外分光光度計
紅外線：波長大于0.76um，小于500um的電磁波。 Hooke定律來描述分子的伸縮振動。
當(dāng)分子的振動頻率與入射的紅外頻率相同時，分子對紅外產(chǎn)生吸收。伸縮振動和彎曲振動。
基頻峰：分子吸收一定頻率的紅外線，振動能級由基態(tài)（V=0）躍遷至第一激發(fā)態(tài)時產(chǎn)生的吸收峰。
倍頻峰：振動能級由基態(tài)躍至第二、三激發(fā)態(tài)。統(tǒng)稱泛頻峰。
吸收峰：用于鑒別官能團(tuán)存在的吸收峰稱特征吸收峰。
指紋區(qū)：1250-400cm （8.0-25um）的低頻區(qū)稱為指紋區(qū)。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 收集整理www.med66.com
紅外分光光度計主要部件：光源、吸收池、單色器（棱鏡和光柵）和檢測器（真空熱電偶）及記錄裝置。
一、基本原理醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 收集整理www.med66.com
紫外——可見分光光度法：是根據(jù)物質(zhì)分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法。操作簡單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。
波長長（頻率?。┑墓饩€能量小，波長短（頻率大）的光線能量大。
100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m
通指
X-射線 紫外區(qū) 可見區(qū) 紅外區(qū) 微波區(qū) 無線電波區(qū)
Beer-lambert定律： A=E l c A——吸收度 E-吸收系數(shù) l ——液層厚度 c——溶液濃度
吸收度濃度與厚度的關(guān)系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是單色光。
摩爾吸收系數(shù)：指在一定波長下，溶液濃度為1mol/L ， 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
百分吸收系數(shù)：指在一定波長下，溶液濃度為1%（W/V） ， 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
影響B(tài)eer定律因素：化學(xué)因素，光學(xué)因素
二、紫外——可見分光光度計： 主要部件：醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 收集整理www.med66.com
1、光源：要求光譜的光源，氫燈和鎢燈（350nm）
2、單色器：進(jìn)口狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件（棱鏡和光柵）、聚焦透鏡和出口狹縫組成。
3、吸收池：用光學(xué)玻璃制成的吸收池，只能用于可見光區(qū)。用熔融石英（氧化硅），可見紫外光區(qū)。
4、檢測器：光電池：（硒光電池：用于可見光；硅光電池：紫外可見光） 內(nèi)阻小，易疲勞。
光電管：內(nèi)阻高，電流易放大 .
5、訊號處理和顯示器
三、定性與定量方法醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 收集整理www.med66.com
（一）、定性鑒別：是多數(shù)有機(jī)化合物具有吸收光譜特征。一般用對比法。
1、對比吸收光譜特征數(shù)據(jù)
2、對比吸收度（或吸收系數(shù)）比值
3、對比吸收光譜的一致性
（二）、純度檢查：雜質(zhì)檢查與雜質(zhì)限量檢測
（三）、含量測定：
1、吸收系數(shù)法
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法
3、對照法
第二節(jié) 熒光分析法
熒光分析法：利用熒光的物理特性而進(jìn)行定性與定量測定的方法。熒光法比紫外可見靈敏。
熒光光度計：激發(fā)光源、樣品池、檢測器、濾光片和單色器。
第三節(jié) 紅外分光光度計
紅外線：波長大于0.76um，小于500um的電磁波。 Hooke定律來描述分子的伸縮振動。
當(dāng)分子的振動頻率與入射的紅外頻率相同時，分子對紅外產(chǎn)生吸收。伸縮振動和彎曲振動。
基頻峰：分子吸收一定頻率的紅外線，振動能級由基態(tài)（V=0）躍遷至第一激發(fā)態(tài)時產(chǎn)生的吸收峰。
倍頻峰：振動能級由基態(tài)躍至第二、三激發(fā)態(tài)。統(tǒng)稱泛頻峰。
吸收峰：用于鑒別官能團(tuán)存在的吸收峰稱特征吸收峰。
指紋區(qū)：1250-400cm （8.0-25um）的低頻區(qū)稱為指紋區(qū)。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 收集整理www.med66.com
紅外分光光度計主要部件：光源、吸收池、單色器（棱鏡和光柵）和檢測器（真空熱電偶）及記錄裝置。