化學(xué)致突變物的檢測所觀察的現(xiàn)象并不一定就是三類遺傳學(xué)損傷,而可能是致突變過程中發(fā)生的其他作用(事件)。
(一)致突變試驗(yàn)的遺傳學(xué)終點(diǎn)和試驗(yàn)組合的選擇
將致突變試驗(yàn)觀察到的現(xiàn)象所反映的各種遺傳學(xué)事件稱為遺傳學(xué)終點(diǎn)。遺傳學(xué)終點(diǎn)分為4類:①基因突變;②染色體畸變;③不分離;④原發(fā)性DNA損傷。
成組試驗(yàn)組合的原則為:①多個(gè)遺傳學(xué)終點(diǎn);②原核生物和真核生物;③體外試驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn);④體細(xì)胞和生殖細(xì)胞。
(二)常用的致突變試驗(yàn)方法
1.細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)-鼠傷寒沙門菌回變試驗(yàn)(Ames試驗(yàn))
原核生物體外試驗(yàn)、基因突變。
鼠傷寒沙門菌試驗(yàn)菌株(突變型)不能自行合成組氨酸,在不含組氨酸的最低營養(yǎng)平皿上不能生長。突變型試驗(yàn)菌株可被各種誘變因素誘導(dǎo),回復(fù)突變成野生型,即恢復(fù)了合成組氨酸的能力,可在此平皿上生長成可見菌落。
鼠傷寒沙門菌野生型(原養(yǎng)型)←→組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株(his+)回復(fù)突變(his)
如果受試物處理組回變菌落數(shù)顯著超過陰性對照組;并有劑量反應(yīng)關(guān)系,即可判定受試物為鼠傷寒沙門菌的致突變物。
Ames試驗(yàn)中使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株為TA97、TA98、TA 100和TA 102.his-突變外,附加突變:①深粗糙型突變(rfa)、②切除修復(fù)基因uvrB缺失(△uvrB)和③抗藥因子(R因子即抗氨芐青霉素的PKMl01質(zhì)粒和抗四環(huán)素的PAQ1質(zhì)粒)。
TA97和TA98主要用于檢測移碼型突變;TA100和TA102可檢測堿基置換。
有點(diǎn)試驗(yàn)和摻入試驗(yàn)兩種。應(yīng)分別進(jìn)行不加及加代謝活化系統(tǒng)的試驗(yàn),常用為S9混合液,即用多氯聯(lián)苯誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿經(jīng)9000 g離心得到的上清液,再加上NADP及葡萄糖-6-磷酸等輔助因子。
(一)致突變試驗(yàn)的遺傳學(xué)終點(diǎn)和試驗(yàn)組合的選擇
將致突變試驗(yàn)觀察到的現(xiàn)象所反映的各種遺傳學(xué)事件稱為遺傳學(xué)終點(diǎn)。遺傳學(xué)終點(diǎn)分為4類:①基因突變;②染色體畸變;③不分離;④原發(fā)性DNA損傷。
成組試驗(yàn)組合的原則為:①多個(gè)遺傳學(xué)終點(diǎn);②原核生物和真核生物;③體外試驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn);④體細(xì)胞和生殖細(xì)胞。
(二)常用的致突變試驗(yàn)方法
1.細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)-鼠傷寒沙門菌回變試驗(yàn)(Ames試驗(yàn))
原核生物體外試驗(yàn)、基因突變。
鼠傷寒沙門菌試驗(yàn)菌株(突變型)不能自行合成組氨酸,在不含組氨酸的最低營養(yǎng)平皿上不能生長。突變型試驗(yàn)菌株可被各種誘變因素誘導(dǎo),回復(fù)突變成野生型,即恢復(fù)了合成組氨酸的能力,可在此平皿上生長成可見菌落。
鼠傷寒沙門菌野生型(原養(yǎng)型)←→組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株(his+)回復(fù)突變(his)
如果受試物處理組回變菌落數(shù)顯著超過陰性對照組;并有劑量反應(yīng)關(guān)系,即可判定受試物為鼠傷寒沙門菌的致突變物。
Ames試驗(yàn)中使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株為TA97、TA98、TA 100和TA 102.his-突變外,附加突變:①深粗糙型突變(rfa)、②切除修復(fù)基因uvrB缺失(△uvrB)和③抗藥因子(R因子即抗氨芐青霉素的PKMl01質(zhì)粒和抗四環(huán)素的PAQ1質(zhì)粒)。
TA97和TA98主要用于檢測移碼型突變;TA100和TA102可檢測堿基置換。
有點(diǎn)試驗(yàn)和摻入試驗(yàn)兩種。應(yīng)分別進(jìn)行不加及加代謝活化系統(tǒng)的試驗(yàn),常用為S9混合液,即用多氯聯(lián)苯誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿經(jīng)9000 g離心得到的上清液,再加上NADP及葡萄糖-6-磷酸等輔助因子。