格式指導(dǎo)：
(一)科研開題報(bào)告的概念
科研開題報(bào)告是指課題確定以后、正式開始課題研究之前撰寫的有關(guān)課題研究任務(wù)的總體計(jì)劃安排文書，主要介紹所承擔(dān)課題研究的意義、目的、推廣價(jià)值，研究的主要內(nèi)容和技術(shù)關(guān)鍵，以及準(zhǔn)備工作等方面的情況，并對科研的具體方案、措施和研究進(jìn)度等作出計(jì)劃安排?？蒲腥藛T可以通過科研開題報(bào)告，概括課題的準(zhǔn)備情況和對課題的認(rèn)識(shí)程度，使具體的研究措施、目標(biāo)、條件和要求等更為明確;科研管理部門可以把科研開題報(bào)告作為審題的依據(jù);在課題研究過程中，可以將科研開題報(bào)告作為指導(dǎo)。
(二)科研開題報(bào)告的結(jié)構(gòu)與寫法, 科研開題報(bào)告一般由封面和內(nèi)頁兩部分構(gòu)成。
1.封面 封面主要包括項(xiàng)目名稱、負(fù)責(zé)單位或主持人姓名，項(xiàng)目類別，參加單位，主管單位，起止時(shí)間，填報(bào)日期，保密等級等內(nèi)容。項(xiàng)目類別由主管部門填寫;密級由課題主持人和科研主管部門商定，或由下達(dá)任務(wù)的部門規(guī)定，分為機(jī)密、秘密、三個(gè)等級;其余各項(xiàng)由課題主持人填寫
2.內(nèi)頁
(1)課題的由來、研究的目的和意義，國內(nèi)外對該課題及相關(guān)課題的研究現(xiàn)狀說明選題的背景、原因;提出課題研究的目標(biāo)·闡述課題研究對科學(xué)研究、國防建設(shè)、人民生活、國民經(jīng)濟(jì)、社會(huì)發(fā)展、教育發(fā)展等方面可能產(chǎn)生的積極影響;對學(xué)科發(fā)展所能起到的推動(dòng)作用，在學(xué)術(shù)研究方面的價(jià)值和意義;簡介國內(nèi)外對該課題的研究概況、已經(jīng)達(dá)到的水平和未來的發(fā)展趨勢
(2)準(zhǔn)備情況和主要措施。寫明主要的參考文獻(xiàn)資料、人員選擇、所需儀器設(shè)備、材料及加工實(shí)驗(yàn)條件等準(zhǔn)備情況，并且把完成研究任務(wù)擬采取的技術(shù)措施和組織措施交代清楚。
(3)研究方案的選擇與論證·闡述選定某個(gè)研究方案的依據(jù)，對所選項(xiàng)研究方案的合理性和可行性進(jìn)行論證
(4)課題研究的主要內(nèi)容、主要方法和技術(shù)關(guān)鍵。主要內(nèi)容是指需要進(jìn)行的考察、調(diào)研、實(shí)驗(yàn)、設(shè)計(jì)，以及研究途徑;技術(shù)關(guān)鍵是指課題研究的主要技術(shù)環(huán)節(jié)、關(guān)鍵技術(shù)、技術(shù)難點(diǎn)、技術(shù)指標(biāo)、預(yù)期研究成果。
(5)地點(diǎn)、試驗(yàn)規(guī)模和進(jìn)度安排。分階段安排試驗(yàn)地點(diǎn)、試驗(yàn)規(guī)模、試驗(yàn)進(jìn)度等，以便明確各階段要達(dá)到的研究、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)
(6)承擔(dān)單位和主要協(xié)作單位及其分工。如果課題研究是由幾個(gè)單位合作進(jìn)行的，應(yīng)有牽頭單位，單位之間應(yīng)有明確的分工。
(7)具體進(jìn)度和完成時(shí)間。進(jìn)度要求具體、明確。
(8)所需儀器設(shè)備及其解決途徑。說明科研需添置的儀器設(shè)備的名稱、規(guī)格、型號、數(shù)量等，并且寫明哪些儀器設(shè)備要從國外引進(jìn)，哪些在國內(nèi)購置等。
(9)項(xiàng)目主持人和主要成員。寫明項(xiàng)目主持人和主要成員的姓名、單位、職稱以及業(yè)務(wù)簡歷等情況及任務(wù)分工。
(10)經(jīng)費(fèi)預(yù)算及其來源。預(yù)先概算出研究中所必需的材料、儀器設(shè)備、資料、差旅、基金等費(fèi)用，寫明預(yù)期的經(jīng)費(fèi)總額及各階段所必需的經(jīng)費(fèi)數(shù)額，同時(shí)注明經(jīng)費(fèi)來源。
(11)有關(guān)專家的評議意見。凡是重點(diǎn)科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目都必須經(jīng)過有關(guān)專家評議，一般由科研主管部門委托有關(guān)專家填寫。
(12)科研主管部門審查意見。上級主管部門在嚴(yán)格審查課題的科學(xué)性、可行性、經(jīng)費(fèi)預(yù)算等重要指標(biāo)之后，提出是否批準(zhǔn)列為年度計(jì)劃的意見。 科研開題報(bào)告的格式多采用表格式々由于課題的性質(zhì)及規(guī)模不同，科研開題報(bào)告的格式和內(nèi)容也略有不同，具體寫法要根據(jù)課題性質(zhì)、準(zhǔn)備情況和主管部門的要求來確定。
(三)科研開題報(bào)告的寫作要求
1.嚴(yán)格按照規(guī)定寫作 科研開題報(bào)告必須由科研的主要責(zé)任者提出并按照有關(guān)主管部門規(guī)定的格式和要求逐項(xiàng)填寫，所有內(nèi)容要逐項(xiàng)明確
2.重視研究方案的制訂 在制訂研究方案、安排進(jìn)度時(shí)要實(shí)事求是，充分考慮到科研中一些不確定因素的影響，量力而行，要留有余地
3.突出研究課題的重點(diǎn)內(nèi)容 首先要突出研究課題的必要性和緊迫性，闡明課題研究的具體目標(biāo)和理論及實(shí)踐意義;其次要突出研究課題的創(chuàng)新性，通過橫向比較，闡明其學(xué)術(shù)價(jià)值或應(yīng)用價(jià)值; 再次是突出研究課題的科學(xué)性，以一定的現(xiàn)實(shí)材料或科學(xué)理論作根據(jù);另外，還要突出研究課題的可行性，從研究人員所必需的知識(shí)結(jié)構(gòu)、能力素養(yǎng)、責(zé)任感等主觀條件，到財(cái)力、物力等客觀條件的諸方面，突出研究所具備的必要條件。
范文參考：
立題依據(jù)(科學(xué)意義及國內(nèi)外現(xiàn)狀分析及參考文獻(xiàn))
惡性黑色素瘤是一種高度惡性且具侵襲性的癌之一，多發(fā)生于皮膚，早期發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。對放、化療不敏感，在世界范圍內(nèi)發(fā)病率增高，人們一直在期待著可以征服惡性黑素瘤的新的療法的出現(xiàn)!
近大量的數(shù)據(jù)表明惡性腫瘤的發(fā)展與T-鈣粘蛋白的表達(dá)變化相關(guān).T-鈣粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌[1-3] 、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4-9]等多種惡性腫瘤中被檢測到表達(dá)減少.近的研究表明T/H 鈣粘蛋白在乳腺癌中的重新表達(dá)能抑制腫瘤細(xì)胞的生長,降低體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的侵襲潛能[1].T/H 鈣粘蛋白這個(gè)新型鈣粘蛋白分子在人類許多癌細(xì)胞中表達(dá)都降低表明它或許在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[10]及維持正常細(xì)胞的表型中起重要作用[11].
T/H 鈣粘蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系,也許它會(huì)為腫瘤的診斷和治療帶來新的契機(jī).
T-鈣粘蛋白是否對惡性黑色素瘤也有作用，目前還沒有相關(guān)研究的報(bào)道，所以本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)行相關(guān)方面的探討性研究!
研究內(nèi)容及預(yù)期成果(說明具體研究內(nèi)容、創(chuàng)新點(diǎn)及擬解決的關(guān)鍵問題、預(yù)期成果及提供形式)
研究內(nèi)容：
第一部分：正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T-cadherin表達(dá)情況
第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建
第三部分：T-cadherin基因的真核表達(dá)及生物活性分析
創(chuàng)新點(diǎn)：首次將T-cadherin基因轉(zhuǎn)染黑素瘤細(xì)胞
擬解決的關(guān)鍵問題：通過RT-PCR反應(yīng)擴(kuò)增出T-cadherin的基因全長。
預(yù)期成果及提供形式：
觀察T-鈣粘蛋白在正常皮膚組織細(xì)胞、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況!
進(jìn)一步闡明T-鈣粘蛋白作用機(jī)制
T-鈣粘蛋白基因轉(zhuǎn)染入黑色素瘤細(xì)胞后觀察對其增殖和轉(zhuǎn)移活性的抑制情況，探索臨床診斷和治療黑色素瘤及其它腫瘤的方法!
研究方案(包括研究方法、技術(shù)路線、研究進(jìn)度安排)
研究方法：
第一部分：正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T-cadherin表達(dá)情況
免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)
材料：從正常人皮膚切取的痣組織，人黑色素瘤細(xì)胞株
主要試劑和溶液
(1)第一抗體：兔抗人T-cadherin 抗體
(2)第二抗體：生物素標(biāo)記羊抗兔IgG
(3) 三抗 ：鏈親和霉素標(biāo)記HRP
設(shè)備
方法
(1)冷凍切片的免疫染色程序
(2)活細(xì)胞的免疫染色程序
熒光顯微鏡檢
注意：為保證結(jié)果的可靠性應(yīng)該同時(shí)設(shè)有對照
陽性對照(正常組織) ;
陰性對照(PBS代替一抗)以證明抗體的特異性。
第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建
材料：
(1)組織和細(xì)胞
(2)菌株與質(zhì)粒
(3)工具酶
(4)試劑
(5)儀器
方法
(1)引物的設(shè)計(jì)
(2)總RNA的提?。寒惲蚯杷犭?酚-氯仿抽提一步法
(3)甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳分析其質(zhì)量，觀察所提RNA有無明顯降解;
(4)逆轉(zhuǎn)錄RT反應(yīng) ：為了證實(shí)RT反應(yīng)的成功設(shè)管家基因GAPDH為內(nèi)對照
(5)PCR擴(kuò)增 ：利用上下游引物，在DNA聚合酶下對目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，PCR過程設(shè)β-actin為內(nèi)對照
(6)PCR產(chǎn)物的回收、純化
(7)PCR產(chǎn)物的克隆
(8)DNA序列測定
(9)真核重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
(10)陽性重組質(zhì)粒的鑒定和篩選
(11)質(zhì)粒的大量提取
(12)轉(zhuǎn)染黑色素瘤細(xì)胞
第三部分：T-鈣粘蛋白基因的真核表達(dá)及生物活性分析
材料
方法
(1)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)
(2) Western印跡法檢測轉(zhuǎn)染后蛋白的表達(dá)
(3)流式細(xì)胞周期分析
(4)凋亡的檢測
技術(shù)路線圖：
研究進(jìn)度安排：
學(xué)習(xí)學(xué)位課程，查閱文獻(xiàn)，完成課題設(shè)計(jì)
基本完成實(shí)驗(yàn)研究工作
完成實(shí)驗(yàn)補(bǔ)遺工作并 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，撰寫論文
論文答辯
經(jīng)費(fèi)預(yù)算
試劑費(fèi)用： 1500元《
BR》組織及細(xì)胞： 100元
論文打印費(fèi)： 100元
答辯費(fèi)： 150元
總計(jì)： 19000元
課題可行性分析
已完成黑色素瘤及T-鈣粘蛋白研究新進(jìn)展的文獻(xiàn)檢索和綜述報(bào)告工作。
所有實(shí)驗(yàn)均在承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚病研究室和中心實(shí)驗(yàn)室完成。實(shí)驗(yàn)室的老師實(shí)驗(yàn)技術(shù)熟練，在細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組化及分子生物學(xué)等方面都可給予指導(dǎo);實(shí)驗(yàn)所需的科研儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)室均具備。
參考文獻(xiàn):
Toyooka,KO.,Toyooka S.,Virmani AK.,Sathyanarayana UG et al Cancer Res 2015 Jun 1;61(11):4556 60
Lee,S.W.,1996 Nat.Med,2:776 782
Zhong ,Y.,Y.Delgado.,J.Gomez,S.W.Lee et al 2015 Clin Cancer Res.
Takeuchi,M.,Misaki,A.,Chen,B.K.,et al (1999)Histopathology,35,87 8
K#from 醫(yī)學(xué)科研課題開題報(bào)告來自學(xué)優(yōu)網(wǎng)http://www.gkstk.com/ end#awakami,M.,Staub,J.,Cliby,W.,et al 1999Int.J.Oncol.,15,715 720
Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,et al(1998)Hum.Genet.,43,285 286
Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,et al (1998)Hum.Genet.,103,96 101
Mori,Y.,Matsunaga,M.,Abe,T.,et al (1999)Br J.Cancer,80,556 562
Lee.S.W(1996)Nat.Med.,2,776 782
Hung.Z.Y.,Wu,Y.,Hedric,N&Gutmann,D.H(2015)Mol Cell.Biol 23,566-578
Lee SW.,Reimercl.,Campbell DB.,et al 1998Jun;19(6):1157-9
(一)科研開題報(bào)告的概念
科研開題報(bào)告是指課題確定以后、正式開始課題研究之前撰寫的有關(guān)課題研究任務(wù)的總體計(jì)劃安排文書，主要介紹所承擔(dān)課題研究的意義、目的、推廣價(jià)值，研究的主要內(nèi)容和技術(shù)關(guān)鍵，以及準(zhǔn)備工作等方面的情況，并對科研的具體方案、措施和研究進(jìn)度等作出計(jì)劃安排?？蒲腥藛T可以通過科研開題報(bào)告，概括課題的準(zhǔn)備情況和對課題的認(rèn)識(shí)程度，使具體的研究措施、目標(biāo)、條件和要求等更為明確;科研管理部門可以把科研開題報(bào)告作為審題的依據(jù);在課題研究過程中，可以將科研開題報(bào)告作為指導(dǎo)。
(二)科研開題報(bào)告的結(jié)構(gòu)與寫法, 科研開題報(bào)告一般由封面和內(nèi)頁兩部分構(gòu)成。
1.封面 封面主要包括項(xiàng)目名稱、負(fù)責(zé)單位或主持人姓名，項(xiàng)目類別，參加單位，主管單位，起止時(shí)間，填報(bào)日期，保密等級等內(nèi)容。項(xiàng)目類別由主管部門填寫;密級由課題主持人和科研主管部門商定，或由下達(dá)任務(wù)的部門規(guī)定，分為機(jī)密、秘密、三個(gè)等級;其余各項(xiàng)由課題主持人填寫
2.內(nèi)頁
(1)課題的由來、研究的目的和意義，國內(nèi)外對該課題及相關(guān)課題的研究現(xiàn)狀說明選題的背景、原因;提出課題研究的目標(biāo)·闡述課題研究對科學(xué)研究、國防建設(shè)、人民生活、國民經(jīng)濟(jì)、社會(huì)發(fā)展、教育發(fā)展等方面可能產(chǎn)生的積極影響;對學(xué)科發(fā)展所能起到的推動(dòng)作用，在學(xué)術(shù)研究方面的價(jià)值和意義;簡介國內(nèi)外對該課題的研究概況、已經(jīng)達(dá)到的水平和未來的發(fā)展趨勢
(2)準(zhǔn)備情況和主要措施。寫明主要的參考文獻(xiàn)資料、人員選擇、所需儀器設(shè)備、材料及加工實(shí)驗(yàn)條件等準(zhǔn)備情況，并且把完成研究任務(wù)擬采取的技術(shù)措施和組織措施交代清楚。
(3)研究方案的選擇與論證·闡述選定某個(gè)研究方案的依據(jù)，對所選項(xiàng)研究方案的合理性和可行性進(jìn)行論證
(4)課題研究的主要內(nèi)容、主要方法和技術(shù)關(guān)鍵。主要內(nèi)容是指需要進(jìn)行的考察、調(diào)研、實(shí)驗(yàn)、設(shè)計(jì)，以及研究途徑;技術(shù)關(guān)鍵是指課題研究的主要技術(shù)環(huán)節(jié)、關(guān)鍵技術(shù)、技術(shù)難點(diǎn)、技術(shù)指標(biāo)、預(yù)期研究成果。
(5)地點(diǎn)、試驗(yàn)規(guī)模和進(jìn)度安排。分階段安排試驗(yàn)地點(diǎn)、試驗(yàn)規(guī)模、試驗(yàn)進(jìn)度等，以便明確各階段要達(dá)到的研究、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)
(6)承擔(dān)單位和主要協(xié)作單位及其分工。如果課題研究是由幾個(gè)單位合作進(jìn)行的，應(yīng)有牽頭單位，單位之間應(yīng)有明確的分工。
(7)具體進(jìn)度和完成時(shí)間。進(jìn)度要求具體、明確。
(8)所需儀器設(shè)備及其解決途徑。說明科研需添置的儀器設(shè)備的名稱、規(guī)格、型號、數(shù)量等，并且寫明哪些儀器設(shè)備要從國外引進(jìn)，哪些在國內(nèi)購置等。
(9)項(xiàng)目主持人和主要成員。寫明項(xiàng)目主持人和主要成員的姓名、單位、職稱以及業(yè)務(wù)簡歷等情況及任務(wù)分工。
(10)經(jīng)費(fèi)預(yù)算及其來源。預(yù)先概算出研究中所必需的材料、儀器設(shè)備、資料、差旅、基金等費(fèi)用，寫明預(yù)期的經(jīng)費(fèi)總額及各階段所必需的經(jīng)費(fèi)數(shù)額，同時(shí)注明經(jīng)費(fèi)來源。
(11)有關(guān)專家的評議意見。凡是重點(diǎn)科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目都必須經(jīng)過有關(guān)專家評議，一般由科研主管部門委托有關(guān)專家填寫。
(12)科研主管部門審查意見。上級主管部門在嚴(yán)格審查課題的科學(xué)性、可行性、經(jīng)費(fèi)預(yù)算等重要指標(biāo)之后，提出是否批準(zhǔn)列為年度計(jì)劃的意見。 科研開題報(bào)告的格式多采用表格式々由于課題的性質(zhì)及規(guī)模不同，科研開題報(bào)告的格式和內(nèi)容也略有不同，具體寫法要根據(jù)課題性質(zhì)、準(zhǔn)備情況和主管部門的要求來確定。
(三)科研開題報(bào)告的寫作要求
1.嚴(yán)格按照規(guī)定寫作 科研開題報(bào)告必須由科研的主要責(zé)任者提出并按照有關(guān)主管部門規(guī)定的格式和要求逐項(xiàng)填寫，所有內(nèi)容要逐項(xiàng)明確
2.重視研究方案的制訂 在制訂研究方案、安排進(jìn)度時(shí)要實(shí)事求是，充分考慮到科研中一些不確定因素的影響，量力而行，要留有余地
3.突出研究課題的重點(diǎn)內(nèi)容 首先要突出研究課題的必要性和緊迫性，闡明課題研究的具體目標(biāo)和理論及實(shí)踐意義;其次要突出研究課題的創(chuàng)新性，通過橫向比較，闡明其學(xué)術(shù)價(jià)值或應(yīng)用價(jià)值; 再次是突出研究課題的科學(xué)性，以一定的現(xiàn)實(shí)材料或科學(xué)理論作根據(jù);另外，還要突出研究課題的可行性，從研究人員所必需的知識(shí)結(jié)構(gòu)、能力素養(yǎng)、責(zé)任感等主觀條件，到財(cái)力、物力等客觀條件的諸方面，突出研究所具備的必要條件。
范文參考：
立題依據(jù)(科學(xué)意義及國內(nèi)外現(xiàn)狀分析及參考文獻(xiàn))
惡性黑色素瘤是一種高度惡性且具侵襲性的癌之一，多發(fā)生于皮膚，早期發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。對放、化療不敏感，在世界范圍內(nèi)發(fā)病率增高，人們一直在期待著可以征服惡性黑素瘤的新的療法的出現(xiàn)!
近大量的數(shù)據(jù)表明惡性腫瘤的發(fā)展與T-鈣粘蛋白的表達(dá)變化相關(guān).T-鈣粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌[1-3] 、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4-9]等多種惡性腫瘤中被檢測到表達(dá)減少.近的研究表明T/H 鈣粘蛋白在乳腺癌中的重新表達(dá)能抑制腫瘤細(xì)胞的生長,降低體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的侵襲潛能[1].T/H 鈣粘蛋白這個(gè)新型鈣粘蛋白分子在人類許多癌細(xì)胞中表達(dá)都降低表明它或許在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[10]及維持正常細(xì)胞的表型中起重要作用[11].
T/H 鈣粘蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系,也許它會(huì)為腫瘤的診斷和治療帶來新的契機(jī).
T-鈣粘蛋白是否對惡性黑色素瘤也有作用，目前還沒有相關(guān)研究的報(bào)道，所以本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)行相關(guān)方面的探討性研究!
研究內(nèi)容及預(yù)期成果(說明具體研究內(nèi)容、創(chuàng)新點(diǎn)及擬解決的關(guān)鍵問題、預(yù)期成果及提供形式)
研究內(nèi)容：
第一部分：正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T-cadherin表達(dá)情況
第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建
第三部分：T-cadherin基因的真核表達(dá)及生物活性分析
創(chuàng)新點(diǎn)：首次將T-cadherin基因轉(zhuǎn)染黑素瘤細(xì)胞
擬解決的關(guān)鍵問題：通過RT-PCR反應(yīng)擴(kuò)增出T-cadherin的基因全長。
預(yù)期成果及提供形式：
觀察T-鈣粘蛋白在正常皮膚組織細(xì)胞、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況!
進(jìn)一步闡明T-鈣粘蛋白作用機(jī)制
T-鈣粘蛋白基因轉(zhuǎn)染入黑色素瘤細(xì)胞后觀察對其增殖和轉(zhuǎn)移活性的抑制情況，探索臨床診斷和治療黑色素瘤及其它腫瘤的方法!
研究方案(包括研究方法、技術(shù)路線、研究進(jìn)度安排)
研究方法：
第一部分：正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T-cadherin表達(dá)情況
免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)
材料：從正常人皮膚切取的痣組織，人黑色素瘤細(xì)胞株
主要試劑和溶液
(1)第一抗體：兔抗人T-cadherin 抗體
(2)第二抗體：生物素標(biāo)記羊抗兔IgG
(3) 三抗 ：鏈親和霉素標(biāo)記HRP
設(shè)備
方法
(1)冷凍切片的免疫染色程序
(2)活細(xì)胞的免疫染色程序
熒光顯微鏡檢
注意：為保證結(jié)果的可靠性應(yīng)該同時(shí)設(shè)有對照
陽性對照(正常組織) ;
陰性對照(PBS代替一抗)以證明抗體的特異性。
第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建
材料：
(1)組織和細(xì)胞
(2)菌株與質(zhì)粒
(3)工具酶
(4)試劑
(5)儀器
方法
(1)引物的設(shè)計(jì)
(2)總RNA的提?。寒惲蚯杷犭?酚-氯仿抽提一步法
(3)甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳分析其質(zhì)量，觀察所提RNA有無明顯降解;
(4)逆轉(zhuǎn)錄RT反應(yīng) ：為了證實(shí)RT反應(yīng)的成功設(shè)管家基因GAPDH為內(nèi)對照
(5)PCR擴(kuò)增 ：利用上下游引物，在DNA聚合酶下對目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，PCR過程設(shè)β-actin為內(nèi)對照
(6)PCR產(chǎn)物的回收、純化
(7)PCR產(chǎn)物的克隆
(8)DNA序列測定
(9)真核重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
(10)陽性重組質(zhì)粒的鑒定和篩選
(11)質(zhì)粒的大量提取
(12)轉(zhuǎn)染黑色素瘤細(xì)胞
第三部分：T-鈣粘蛋白基因的真核表達(dá)及生物活性分析
材料
方法
(1)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)
(2) Western印跡法檢測轉(zhuǎn)染后蛋白的表達(dá)
(3)流式細(xì)胞周期分析
(4)凋亡的檢測
技術(shù)路線圖：
研究進(jìn)度安排：
學(xué)習(xí)學(xué)位課程，查閱文獻(xiàn)，完成課題設(shè)計(jì)
基本完成實(shí)驗(yàn)研究工作
完成實(shí)驗(yàn)補(bǔ)遺工作并 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，撰寫論文
論文答辯
經(jīng)費(fèi)預(yù)算
試劑費(fèi)用： 1500元《
BR》組織及細(xì)胞： 100元
論文打印費(fèi)： 100元
答辯費(fèi)： 150元
總計(jì)： 19000元
課題可行性分析
已完成黑色素瘤及T-鈣粘蛋白研究新進(jìn)展的文獻(xiàn)檢索和綜述報(bào)告工作。
所有實(shí)驗(yàn)均在承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚病研究室和中心實(shí)驗(yàn)室完成。實(shí)驗(yàn)室的老師實(shí)驗(yàn)技術(shù)熟練，在細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組化及分子生物學(xué)等方面都可給予指導(dǎo);實(shí)驗(yàn)所需的科研儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)室均具備。
參考文獻(xiàn):
Toyooka,KO.,Toyooka S.,Virmani AK.,Sathyanarayana UG et al Cancer Res 2015 Jun 1;61(11):4556 60
Lee,S.W.,1996 Nat.Med,2:776 782
Zhong ,Y.,Y.Delgado.,J.Gomez,S.W.Lee et al 2015 Clin Cancer Res.
Takeuchi,M.,Misaki,A.,Chen,B.K.,et al (1999)Histopathology,35,87 8
K#from 醫(yī)學(xué)科研課題開題報(bào)告來自學(xué)優(yōu)網(wǎng)http://www.gkstk.com/ end#awakami,M.,Staub,J.,Cliby,W.,et al 1999Int.J.Oncol.,15,715 720
Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,et al(1998)Hum.Genet.,43,285 286
Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,et al (1998)Hum.Genet.,103,96 101
Mori,Y.,Matsunaga,M.,Abe,T.,et al (1999)Br J.Cancer,80,556 562
Lee.S.W(1996)Nat.Med.,2,776 782
Hung.Z.Y.,Wu,Y.,Hedric,N&Gutmann,D.H(2015)Mol Cell.Biol 23,566-578
Lee SW.,Reimercl.,Campbell DB.,et al 1998Jun;19(6):1157-9