細(xì)菌染色標(biāo)本在普通光學(xué)顯微鏡下可以觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列、染色性、特殊結(jié)構(gòu)、異染顆粒等。
因?yàn)樵诮咏行缘沫h(huán)境中細(xì)菌都帶有負(fù)電荷，易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合，故常用堿性苯胺染料如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等染色細(xì)菌。
細(xì)菌標(biāo)本經(jīng)染色后，除能清楚看到細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列方式外，還可根據(jù)染色反應(yīng)將細(xì)菌進(jìn)行分類，因此染色標(biāo)本的檢查在細(xì)菌的鑒定中應(yīng)用最廣，具有非常重要的作用。
細(xì)菌染色的基本程序：涂片→固定→染色→→。
常用染料
用于細(xì)菌染色的染料，多為人工合成的含苯環(huán)的有機(jī)化合物，在其苯環(huán)上帶有色基與助色基。帶有色基的苯環(huán)化合物一色原，雖然本身帶色，但與被染物無親和力而不能使之著色，助色基并不顯色，但它本身能解離，解離后的染料可以與被染物結(jié)合生成鹽類，使之著色。根據(jù)助色基解離后的帶電情況，可將染料分為堿性和酸性兩大類。此外，還有復(fù)合染料。
1.堿性染料：電離后顯色離子帶正電荷，易與帶負(fù)電荷的被染物結(jié)合。由于細(xì)菌的等電點(diǎn)在pH2～5之間，在堿性、中性、弱酸性的環(huán)境中細(xì)菌均帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的染料結(jié)合而著色。常用的染料有堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、美藍(lán)等。
2.酸性染料：電離后顯色離子帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的被染物結(jié)合。一般情況下細(xì)菌都帶有負(fù)電荷故不易著色。如果降低菌液的pH使細(xì)菌帶正電荷，則可被染色。酸性染料通常用來染細(xì)胞漿，而很少用于細(xì)菌的染色。常用的酸性染料有伊紅、剛果紅等。
3.復(fù)合染料及熒光染料：復(fù)合染料是堿性染料和酸性染料的復(fù)合物，如瑞氏染料、姬姆薩染料等；熒光染料如熒光標(biāo)記的抗體，熒光素常用異硫氫基熒光素。這些染色常用于某些特殊的染色技術(shù)中。
常用的染色方法
在細(xì)菌感染標(biāo)本的檢查中，臨床上常用的染色方法有革蘭染色、抗酸染色和熒光染色。
1.單染色法：用一種染料將細(xì)菌和周圍物體染成同一種顏色，稱為單染色法。如呂氏美藍(lán)或稀釋復(fù)紅染色法。細(xì)菌經(jīng)單染色法處理后，可觀察其形態(tài)、排列、大小及簡單的結(jié)構(gòu)，但不能顯示各種細(xì)菌染色性的差異。
2.復(fù)染色法：用兩種或兩種以上的染料染色的方法，稱為復(fù)染色法或鑒別染色法。常用的有革蘭染色法和抗酸染色法。
革蘭染色：本法是細(xì)菌學(xué)中最經(jīng)典、最常用的染色方法。除糞便、血液等極少數(shù)標(biāo)本外，絕大多數(shù)標(biāo)本在分離培養(yǎng)之前都要進(jìn)行革蘭染色、鏡檢。通過革蘭染色將所有細(xì)菌分為G+菌和G-菌兩大類，可初步識(shí)別細(xì)菌，縮小范圍，有助于進(jìn)一步鑒定。甚至有時(shí)結(jié)合細(xì)菌特殊形態(tài)結(jié)構(gòu)及排列方式，對(duì)病原菌可進(jìn)行初步鑒定，如腦脊髓膜炎患者，取其腦脊液涂片、革蘭染色、鏡檢，如檢到革蘭陰性、腎形、凹面相對(duì)的雙球菌，位于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外，可報(bào)告“找到革蘭陰性雙球菌，形似腦膜炎奈瑟菌”；如檢到革蘭陽性、菌體周圍有明顯莢膜的雙球菌，可報(bào)告“找到革蘭陽性雙球菌，形似肺炎鏈球菌”。其結(jié)果為臨床早期診斷及治療提供了依據(jù)。
革蘭染色除用以鑒定細(xì)菌外，病原菌革蘭染色特性可為臨床選擇用藥提供參考，幫助臨床制訂有針對(duì)性的治療方案。因?yàn)镚+菌與G-菌對(duì)一些抗生素表現(xiàn)出不同的敏感性，且其致病物質(zhì)及其作用機(jī)理不同。
抗酸染色：抗酸染色也可將細(xì)菌分為兩大類：即抗酸性細(xì)菌和非抗酸性細(xì)菌。因?yàn)榕R床上絕大多數(shù)病原菌為非抗酸性細(xì)菌，所以抗酸染色不作為臨床上常規(guī)的細(xì)菌檢查項(xiàng)目，只針對(duì)性用于結(jié)核病、麻風(fēng)病等的細(xì)菌檢查。疑似結(jié)核分枝桿菌感染的標(biāo)本，經(jīng)抗酸染色后以油鏡檢查，即可作出初步鑒定。將有肺結(jié)核癥狀病人的痰標(biāo)本，制成涂片后，作萋-納染色鏡檢，根據(jù)所見結(jié)果即可報(bào)告“找到抗酸菌”。再如有腎感染癥狀的病人，取其尿標(biāo)本，經(jīng)離心沉淀后作涂片，行萋-納及潘本漢抗酸染色，如兩張涂片均查見紅色抗酸桿菌，可報(bào)告為“找到抗酸分枝桿菌”.對(duì)臨床疾病的診斷和治療具有重要參考價(jià)值。
3.熒光染色：熒光染色法敏感性強(qiáng)，效率高而且容易觀察結(jié)果，在臨床細(xì)菌鑒定中有很大的實(shí)用價(jià)值。主要用于結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及痢疾志賀菌等的檢測。如痰標(biāo)本涂片、固定，用熒光染料金胺0法染色，以熒光顯微鏡檢查，在暗背景中可觀察到呈金黃色熒光的菌球。
除以上所述染色方法外，用于細(xì)菌鑒定的還有鞭毛染色、異染顆粒染色等。鞭毛染色后于顯微鏡下可觀察到菌體上有無鞭毛、鞭毛的位置及數(shù)量，在細(xì)菌鑒定中，特別是非發(fā)酵菌的鑒定中很重要。疑為白喉棒狀桿菌感染，進(jìn)行涂片檢查，除證實(shí)為革蘭陽性典型棒狀桿菌外，還須用異染顆粒染色法，鏡檢異染顆粒，方可初步報(bào)告“檢出形似白喉棒狀桿菌”，為臨床早期診斷提供依據(jù)。
因?yàn)樵诮咏行缘沫h(huán)境中細(xì)菌都帶有負(fù)電荷，易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合，故常用堿性苯胺染料如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等染色細(xì)菌。
細(xì)菌標(biāo)本經(jīng)染色后，除能清楚看到細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列方式外，還可根據(jù)染色反應(yīng)將細(xì)菌進(jìn)行分類，因此染色標(biāo)本的檢查在細(xì)菌的鑒定中應(yīng)用最廣，具有非常重要的作用。
細(xì)菌染色的基本程序：涂片→固定→染色→→。
常用染料
用于細(xì)菌染色的染料，多為人工合成的含苯環(huán)的有機(jī)化合物，在其苯環(huán)上帶有色基與助色基。帶有色基的苯環(huán)化合物一色原，雖然本身帶色，但與被染物無親和力而不能使之著色，助色基并不顯色，但它本身能解離，解離后的染料可以與被染物結(jié)合生成鹽類，使之著色。根據(jù)助色基解離后的帶電情況，可將染料分為堿性和酸性兩大類。此外，還有復(fù)合染料。
1.堿性染料：電離后顯色離子帶正電荷，易與帶負(fù)電荷的被染物結(jié)合。由于細(xì)菌的等電點(diǎn)在pH2～5之間，在堿性、中性、弱酸性的環(huán)境中細(xì)菌均帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的染料結(jié)合而著色。常用的染料有堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、美藍(lán)等。
2.酸性染料：電離后顯色離子帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的被染物結(jié)合。一般情況下細(xì)菌都帶有負(fù)電荷故不易著色。如果降低菌液的pH使細(xì)菌帶正電荷，則可被染色。酸性染料通常用來染細(xì)胞漿，而很少用于細(xì)菌的染色。常用的酸性染料有伊紅、剛果紅等。
3.復(fù)合染料及熒光染料：復(fù)合染料是堿性染料和酸性染料的復(fù)合物，如瑞氏染料、姬姆薩染料等；熒光染料如熒光標(biāo)記的抗體，熒光素常用異硫氫基熒光素。這些染色常用于某些特殊的染色技術(shù)中。
常用的染色方法
在細(xì)菌感染標(biāo)本的檢查中，臨床上常用的染色方法有革蘭染色、抗酸染色和熒光染色。
1.單染色法：用一種染料將細(xì)菌和周圍物體染成同一種顏色，稱為單染色法。如呂氏美藍(lán)或稀釋復(fù)紅染色法。細(xì)菌經(jīng)單染色法處理后，可觀察其形態(tài)、排列、大小及簡單的結(jié)構(gòu)，但不能顯示各種細(xì)菌染色性的差異。
2.復(fù)染色法：用兩種或兩種以上的染料染色的方法，稱為復(fù)染色法或鑒別染色法。常用的有革蘭染色法和抗酸染色法。
革蘭染色：本法是細(xì)菌學(xué)中最經(jīng)典、最常用的染色方法。除糞便、血液等極少數(shù)標(biāo)本外，絕大多數(shù)標(biāo)本在分離培養(yǎng)之前都要進(jìn)行革蘭染色、鏡檢。通過革蘭染色將所有細(xì)菌分為G+菌和G-菌兩大類，可初步識(shí)別細(xì)菌，縮小范圍，有助于進(jìn)一步鑒定。甚至有時(shí)結(jié)合細(xì)菌特殊形態(tài)結(jié)構(gòu)及排列方式，對(duì)病原菌可進(jìn)行初步鑒定，如腦脊髓膜炎患者，取其腦脊液涂片、革蘭染色、鏡檢，如檢到革蘭陰性、腎形、凹面相對(duì)的雙球菌，位于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外，可報(bào)告“找到革蘭陰性雙球菌，形似腦膜炎奈瑟菌”；如檢到革蘭陽性、菌體周圍有明顯莢膜的雙球菌，可報(bào)告“找到革蘭陽性雙球菌，形似肺炎鏈球菌”。其結(jié)果為臨床早期診斷及治療提供了依據(jù)。
革蘭染色除用以鑒定細(xì)菌外，病原菌革蘭染色特性可為臨床選擇用藥提供參考，幫助臨床制訂有針對(duì)性的治療方案。因?yàn)镚+菌與G-菌對(duì)一些抗生素表現(xiàn)出不同的敏感性，且其致病物質(zhì)及其作用機(jī)理不同。
抗酸染色：抗酸染色也可將細(xì)菌分為兩大類：即抗酸性細(xì)菌和非抗酸性細(xì)菌。因?yàn)榕R床上絕大多數(shù)病原菌為非抗酸性細(xì)菌，所以抗酸染色不作為臨床上常規(guī)的細(xì)菌檢查項(xiàng)目，只針對(duì)性用于結(jié)核病、麻風(fēng)病等的細(xì)菌檢查。疑似結(jié)核分枝桿菌感染的標(biāo)本，經(jīng)抗酸染色后以油鏡檢查，即可作出初步鑒定。將有肺結(jié)核癥狀病人的痰標(biāo)本，制成涂片后，作萋-納染色鏡檢，根據(jù)所見結(jié)果即可報(bào)告“找到抗酸菌”。再如有腎感染癥狀的病人，取其尿標(biāo)本，經(jīng)離心沉淀后作涂片，行萋-納及潘本漢抗酸染色，如兩張涂片均查見紅色抗酸桿菌，可報(bào)告為“找到抗酸分枝桿菌”.對(duì)臨床疾病的診斷和治療具有重要參考價(jià)值。
3.熒光染色：熒光染色法敏感性強(qiáng)，效率高而且容易觀察結(jié)果，在臨床細(xì)菌鑒定中有很大的實(shí)用價(jià)值。主要用于結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及痢疾志賀菌等的檢測。如痰標(biāo)本涂片、固定，用熒光染料金胺0法染色，以熒光顯微鏡檢查，在暗背景中可觀察到呈金黃色熒光的菌球。
除以上所述染色方法外，用于細(xì)菌鑒定的還有鞭毛染色、異染顆粒染色等。鞭毛染色后于顯微鏡下可觀察到菌體上有無鞭毛、鞭毛的位置及數(shù)量，在細(xì)菌鑒定中，特別是非發(fā)酵菌的鑒定中很重要。疑為白喉棒狀桿菌感染，進(jìn)行涂片檢查，除證實(shí)為革蘭陽性典型棒狀桿菌外，還須用異染顆粒染色法，鏡檢異染顆粒，方可初步報(bào)告“檢出形似白喉棒狀桿菌”，為臨床早期診斷提供依據(jù)。