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化學(xué)發(fā)光反應(yīng)參與的免疫測定分為以下幾種類型:
(一)化學(xué)發(fā)光酶免疫測定
化學(xué)發(fā)光酶免疫測定(CLEIA)是采用化學(xué)發(fā)光劑作為酶反應(yīng)底物的酶標(biāo)記免疫測定。經(jīng)過酶和發(fā)光兩級(jí)放大,具有很高的靈敏度。以過氧化物酶為標(biāo)記酶、以魯米諾為發(fā)光底物、并加入發(fā)光增強(qiáng)劑以提高敏感度和發(fā)光穩(wěn)定性。應(yīng)用的標(biāo)記酶也可以為堿性磷酸酶,發(fā)光底物為dioxetane磷酸酯,固相載體為磁性微粒。
(二)化學(xué)發(fā)光免疫測定
化學(xué)發(fā)光免疫測定(CLIA),是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的一類免疫測定方法。吖啶酯是較為理想的發(fā)光底物,在堿性環(huán)境中即可被過氧化氫氧化而發(fā)光。
用作標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下幾個(gè)條件:
1.能參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。
2.與抗原或抗體偶聯(lián)后能形成穩(wěn)定的結(jié)合物試劑。
3.偶聯(lián)后仍保留高的量子效應(yīng)和反應(yīng)動(dòng)力。
4.應(yīng)不改變或極少改變被標(biāo)記物的理化特性,特別是免疫活性。
魯米諾類和吖啶酯類發(fā)光劑等均是常用的標(biāo)記發(fā)光劑。
(三)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析
該免疫分析技術(shù)有兩種方法:一是小分子抗原物質(zhì)的測定采用競爭法;二是大分子的抗原物質(zhì)測定采用雙抗體夾心法。該儀器所用固相磁粉顆粒極微小,其直徑僅1.0μm,這樣大大增加了包被表面積,增加抗原或抗體的吸附量,使反應(yīng)速度加快,也使清洗和分離更簡便。其反應(yīng)基本過程:(1)競爭反應(yīng):用過量包被磁顆粒的抗體,與待測的抗原和定量的標(biāo)記吖啶酯抗原同時(shí)加入反應(yīng)杯溫育,其免疫反應(yīng)的結(jié)合形式有兩種,一是標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合成復(fù)合物;二是測定抗原與抗體的結(jié)合形式。(2)雙抗體夾心法:標(biāo)記抗體與被測抗原同時(shí)與包被抗體結(jié)合成一種反應(yīng)形式,即包被抗體-測定抗原-發(fā)光抗體的復(fù)合物。
化學(xué)發(fā)光反應(yīng)參與的免疫測定分為以下幾種類型:
(一)化學(xué)發(fā)光酶免疫測定
化學(xué)發(fā)光酶免疫測定(CLEIA)是采用化學(xué)發(fā)光劑作為酶反應(yīng)底物的酶標(biāo)記免疫測定。經(jīng)過酶和發(fā)光兩級(jí)放大,具有很高的靈敏度。以過氧化物酶為標(biāo)記酶、以魯米諾為發(fā)光底物、并加入發(fā)光增強(qiáng)劑以提高敏感度和發(fā)光穩(wěn)定性。應(yīng)用的標(biāo)記酶也可以為堿性磷酸酶,發(fā)光底物為dioxetane磷酸酯,固相載體為磁性微粒。
(二)化學(xué)發(fā)光免疫測定
化學(xué)發(fā)光免疫測定(CLIA),是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的一類免疫測定方法。吖啶酯是較為理想的發(fā)光底物,在堿性環(huán)境中即可被過氧化氫氧化而發(fā)光。
用作標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下幾個(gè)條件:
1.能參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。
2.與抗原或抗體偶聯(lián)后能形成穩(wěn)定的結(jié)合物試劑。
3.偶聯(lián)后仍保留高的量子效應(yīng)和反應(yīng)動(dòng)力。
4.應(yīng)不改變或極少改變被標(biāo)記物的理化特性,特別是免疫活性。
魯米諾類和吖啶酯類發(fā)光劑等均是常用的標(biāo)記發(fā)光劑。
(三)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析
該免疫分析技術(shù)有兩種方法:一是小分子抗原物質(zhì)的測定采用競爭法;二是大分子的抗原物質(zhì)測定采用雙抗體夾心法。該儀器所用固相磁粉顆粒極微小,其直徑僅1.0μm,這樣大大增加了包被表面積,增加抗原或抗體的吸附量,使反應(yīng)速度加快,也使清洗和分離更簡便。其反應(yīng)基本過程:(1)競爭反應(yīng):用過量包被磁顆粒的抗體,與待測的抗原和定量的標(biāo)記吖啶酯抗原同時(shí)加入反應(yīng)杯溫育,其免疫反應(yīng)的結(jié)合形式有兩種,一是標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合成復(fù)合物;二是測定抗原與抗體的結(jié)合形式。(2)雙抗體夾心法:標(biāo)記抗體與被測抗原同時(shí)與包被抗體結(jié)合成一種反應(yīng)形式,即包被抗體-測定抗原-發(fā)光抗體的復(fù)合物。

