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【理化鑒別】
(1) 聚丙烯酰胺凝膠蛋白電泳鑒別:
① 試劑配制和凝膠制備:試劑和凝膠按文獻(xiàn)方法制備。分離膠濃度為7.5%,濃縮膠濃度為2.5%。
② 樣品液制備:取樣品1g,加入生理鹽水4ml,研磨成勻漿,以4000rpm離心15分鐘,取上清液,加入1倍量丙酮,4000rpm離心15分鐘,放置冰箱中備用。
③ 電泳分析:取樣上清液,加入1/2體積的40%蔗糖液,用微量注射器在凝膠樣品池中加樣,點(diǎn)樣量20μl.上電極液中加入數(shù)滴溴酚藍(lán)指示劑示蹤。電泳開始時(shí),電流控制在10mA,樣品進(jìn)入分離膠后加大至15mA,待指示劑行至末端約1cm時(shí),即可停止電泳。取出膠板,放入7%乙酸溶液中固定10分鐘,然后放入0.2%考馬斯亮蘭考,試大網(wǎng)站收集R250染色液中染色半小時(shí)。用蒸餾水沖去凝膠表面附著的染料,再放入含20%甲醇和7%醋酸的脫色液中,脫色數(shù)小時(shí)至背景無色為止。
電泳結(jié)果:烏梢蛇一級(jí)帶三條,二級(jí)帶和三級(jí)帶各二條,擴(kuò)散帶一條。
(2) 紫外光譜鑒別:取粉末1g,分別用石油醚和無水乙醇各10ml浸泡36小時(shí),前6小時(shí)每隔1小時(shí)振搖1次,濾過,濾液稀釋成一定濃度,置1cm比色池中,UV-265FW紫外分光光度計(jì)上測(cè)定吸收曲線,掃描范圍200~300nm,掃描速度60nm/分鐘。結(jié)果乙醇浸出液在210.0nm,石油醚浸出液在215.0、240.0、246.0處有吸收峰。此特征能與其他蛇類區(qū)別。
【理化鑒別】
(1) 聚丙烯酰胺凝膠蛋白電泳鑒別:
① 試劑配制和凝膠制備:試劑和凝膠按文獻(xiàn)方法制備。分離膠濃度為7.5%,濃縮膠濃度為2.5%。
② 樣品液制備:取樣品1g,加入生理鹽水4ml,研磨成勻漿,以4000rpm離心15分鐘,取上清液,加入1倍量丙酮,4000rpm離心15分鐘,放置冰箱中備用。
③ 電泳分析:取樣上清液,加入1/2體積的40%蔗糖液,用微量注射器在凝膠樣品池中加樣,點(diǎn)樣量20μl.上電極液中加入數(shù)滴溴酚藍(lán)指示劑示蹤。電泳開始時(shí),電流控制在10mA,樣品進(jìn)入分離膠后加大至15mA,待指示劑行至末端約1cm時(shí),即可停止電泳。取出膠板,放入7%乙酸溶液中固定10分鐘,然后放入0.2%考馬斯亮蘭考,試大網(wǎng)站收集R250染色液中染色半小時(shí)。用蒸餾水沖去凝膠表面附著的染料,再放入含20%甲醇和7%醋酸的脫色液中,脫色數(shù)小時(shí)至背景無色為止。
電泳結(jié)果:烏梢蛇一級(jí)帶三條,二級(jí)帶和三級(jí)帶各二條,擴(kuò)散帶一條。
(2) 紫外光譜鑒別:取粉末1g,分別用石油醚和無水乙醇各10ml浸泡36小時(shí),前6小時(shí)每隔1小時(shí)振搖1次,濾過,濾液稀釋成一定濃度,置1cm比色池中,UV-265FW紫外分光光度計(jì)上測(cè)定吸收曲線,掃描范圍200~300nm,掃描速度60nm/分鐘。結(jié)果乙醇浸出液在210.0nm,石油醚浸出液在215.0、240.0、246.0處有吸收峰。此特征能與其他蛇類區(qū)別。

