【摘要】 目的 檢測特異性人免疫球蛋白的制品相應抗體含量變化情況。方法 采用留樣觀察法和加速試驗法對不同溫度條件下的特異性人免疫球蛋白有效期進行預測。結果 乙型肝炎人免疫球蛋白（HBTG）和破傷風人免疫球蛋白（TIG）于2℃～8℃存放時較為穩(wěn)定，分別是放置3年、1年所檢測的各項指標均無明顯變化。結論 特異性人免疫球蛋白的有效期確定應以常規(guī)觀察測得的結果為最可靠的依據。
【關鍵詞】 特異性人免疫球蛋白 HBIG TIG 穩(wěn)定性試驗
特異性人免疫球蛋白是用疫苗或毒素免疫人體使其血漿產生高效價抗體，經低溫乙醇蛋白分離法制備并經低pH放孵病毒滅活處理的特異性免疫球蛋白制劑，與抗毒素及抗血清相比，特異性人免疫球蛋白在使用過程中不會發(fā)生因注射異種蛋白而產生嚴重的過敏反應，其抗體在患者體內維持時間較長。隨著我國醫(yī)療及健康水平的不斷提高，特異性人免疫球蛋白在臨床上的使用越來越受到關注［1,2］。特異性人免疫球蛋白主要使用成分是IgG，含有針對各種不同抗原的抗體，本文對其穩(wěn)定性的觀察是以抗體活性變化作為主要考察指標，并以HBIG、TIG兩種制品為代表，通過制品在不同溫度下放置一定時間后，檢測其抗體效價等項指標的變化來了解制品的穩(wěn)定性，以確定其有效期，現將有關試驗方法及結果報告如下。
1 材料與方法
1．1 材料
1．1．1 特異性人免疫球蛋白（HBIG、TIG） 均由蘭州生物制品研究所采用低溫乙醇工藝結合低pH放孵滅活病毒步驟制備而成（批號分別為HBIG：20030701、20030702、20030703，200IU/支；TIG：20070401、20070402、20070403，250IU/支，均為液體劑型）。
1．1．2 乙型肝炎表面抗體 抗-HBs放射免疫分析試劑盒：3V診斷技術公司提供。
1．1．3 抗-HBs、TIG標準品 均由中國藥品生物制品檢定所提供。
1．1．4 儀器設備 γ-計數器，2008G型，國營二六二廠生產；HPLC色譜柱：日本產G3000SW，規(guī)格7.5mm×300mm；紫外可見分光光度計：U-2001，日本日立公司。
1．2 方法
1．2．1 抗-HBs效價 按2000年版《中國生物制品規(guī)程》制定，各樣品測定均重復1次，按均值計算。
1．2．2 抗-TT效價 按《中華人民共和國藥典》2005年版（三部）附錄ⅪF破傷風抗毒素效價測定法進行，并將其檢測結果與ELISA法測定結果進行比較。
1．2．3 HBIG、TIG的單體加二聚體的檢查 均按《中華人民共和國藥典》2005年版（三部）的要求進行。
1．2．4 留樣觀察法 將蘭州生物制品研究所制備的HBIG制品置于2℃～8℃、（24±1）℃、（37±1）℃，分別于0、3、6、12、18、24及36個月取出，檢測其有關質量指標，同樣將上述來源的破傷風人免疫球蛋白的（TIG）置于（6±2）℃，于0、3、6、9、12個月取樣，置于（25±2）℃，于0、1、2、3、6個月取樣，檢測其有關質量指標。
2 結果
2．1 抗體效價
2．1．1 抗-HBs效價 乙型肝炎人免疫球蛋白的抗-HBs效價在不同放置條件下的變化結果。結果顯示，制品在2℃～8℃存放3年時，抗-HBs效價無明顯改變，在（24±1）℃存放1年半時，抗-HBs效價平均下降 32.8%，在（37±1）℃存放3個月后，抗-HBs效價開始明顯降低。表1 HBIG在不同放置條件下的抗-HBs效價
2．1．2 抗-TT效價 破傷風人免疫球蛋白的抗-TT效價在不同放置條件下的變化結果，結果顯示，該制品在（6±2）℃存放1年時，破傷風抗體效價無明顯改變；在（25±2）℃存放半年時，破傷風抗體效價平均下降10.41%。
2．2 IgG單體加雙體 特異性人免疫球蛋白中的IgG易于聚合，其中HBIG在2℃～8℃存放3年后，IgG單體加雙體平均下降了1.26%；TIG在（6±2）℃存放1年后，IgG單體加雙體平均下降了1.14%。但上述兩種制品在（24±1）℃存放6個月后單體加雙體的總和開始明顯下降，其變化情況分別 TIG在不同放置條件下的抗-TT效價表3 HBIG IgG單體加雙體在不同條件下放置后的變化表4 TIG IgG單體加雙體在不同條件下放置后的變化
2．3 蛋白質含量及純度 HBIG、TIG蛋白質含量及純度的穩(wěn)定性分別。從中的情況反映出，HBIG樣品在不同溫度下［2℃～8℃、（24±1）℃、（37±1）℃］分別放置1年、2年及3年時，TIG樣品在（6±2）℃和（25±2）℃下分別放置半年和1年時，蛋白質含量和純度基本上沒有發(fā)生改變，均說明這兩項指標較為穩(wěn)定。 表5 HBIG不同放置條件蛋白質含量變化情況 表6 HBIG不同放置條件下蛋白質純度變化表7 TIG不同放置條件蛋白質含量變化情況表8 TIG不同放置條件下蛋白質純度變化
3 討論
生物制品穩(wěn)定性試驗，長期以來大多采用留樣觀察法，此法是在不同溫度下放置考察藥物制劑的穩(wěn)定性，是考察藥物穩(wěn)定性的最可靠方法，能準確真實地反映制品穩(wěn)定性的實際情況。本文進行的穩(wěn)定性試驗的方法依據《中華人民共和國藥典》2005年版附錄ⅪⅩC“原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導原則”，在人免疫球蛋白、靜注人免疫球蛋白（pH 4）穩(wěn)定性試驗的基礎上，試驗樣品在（25±2）℃條件下放置6個月進行加速穩(wěn)定性試驗，在（6±2）℃條件下放置12個月、18個月、36個月進行長期試驗，分別檢測特異性人免疫球蛋白樣品外觀、pH值、抗體效價、純度、蛋白質含量、IgG單體加雙體、無菌檢查、熱原質檢查等多項指標，以觀察其理化及生物學活性的變化情況，為確定此產品的有效期。
特異性人免疫球蛋白有別于其他藥物制劑，其分子量為15萬左右，因其作用成分為蛋白質，易受各種物理或化學因素的影響而出現裂解、聚合、變性等變化，造成其生物學功能下降或損失，從而使療效降低甚至失效，因此應用上述方法進行特異性人免疫球蛋白穩(wěn)定性觀察，對制品有效期的確定也僅是提供參考數據。其有效期確定還應以常規(guī)留樣觀察法測定的穩(wěn)定性結果作為主要依據。
【關鍵詞】 特異性人免疫球蛋白 HBIG TIG 穩(wěn)定性試驗
特異性人免疫球蛋白是用疫苗或毒素免疫人體使其血漿產生高效價抗體，經低溫乙醇蛋白分離法制備并經低pH放孵病毒滅活處理的特異性免疫球蛋白制劑，與抗毒素及抗血清相比，特異性人免疫球蛋白在使用過程中不會發(fā)生因注射異種蛋白而產生嚴重的過敏反應，其抗體在患者體內維持時間較長。隨著我國醫(yī)療及健康水平的不斷提高，特異性人免疫球蛋白在臨床上的使用越來越受到關注［1,2］。特異性人免疫球蛋白主要使用成分是IgG，含有針對各種不同抗原的抗體，本文對其穩(wěn)定性的觀察是以抗體活性變化作為主要考察指標，并以HBIG、TIG兩種制品為代表，通過制品在不同溫度下放置一定時間后，檢測其抗體效價等項指標的變化來了解制品的穩(wěn)定性，以確定其有效期，現將有關試驗方法及結果報告如下。
1 材料與方法
1．1 材料
1．1．1 特異性人免疫球蛋白（HBIG、TIG） 均由蘭州生物制品研究所采用低溫乙醇工藝結合低pH放孵滅活病毒步驟制備而成（批號分別為HBIG：20030701、20030702、20030703，200IU/支；TIG：20070401、20070402、20070403，250IU/支，均為液體劑型）。
1．1．2 乙型肝炎表面抗體 抗-HBs放射免疫分析試劑盒：3V診斷技術公司提供。
1．1．3 抗-HBs、TIG標準品 均由中國藥品生物制品檢定所提供。
1．1．4 儀器設備 γ-計數器，2008G型，國營二六二廠生產；HPLC色譜柱：日本產G3000SW，規(guī)格7.5mm×300mm；紫外可見分光光度計：U-2001，日本日立公司。
1．2 方法
1．2．1 抗-HBs效價 按2000年版《中國生物制品規(guī)程》制定，各樣品測定均重復1次，按均值計算。
1．2．2 抗-TT效價 按《中華人民共和國藥典》2005年版（三部）附錄ⅪF破傷風抗毒素效價測定法進行，并將其檢測結果與ELISA法測定結果進行比較。
1．2．3 HBIG、TIG的單體加二聚體的檢查 均按《中華人民共和國藥典》2005年版（三部）的要求進行。
1．2．4 留樣觀察法 將蘭州生物制品研究所制備的HBIG制品置于2℃～8℃、（24±1）℃、（37±1）℃，分別于0、3、6、12、18、24及36個月取出，檢測其有關質量指標，同樣將上述來源的破傷風人免疫球蛋白的（TIG）置于（6±2）℃，于0、3、6、9、12個月取樣，置于（25±2）℃，于0、1、2、3、6個月取樣，檢測其有關質量指標。
2 結果
2．1 抗體效價
2．1．1 抗-HBs效價 乙型肝炎人免疫球蛋白的抗-HBs效價在不同放置條件下的變化結果。結果顯示，制品在2℃～8℃存放3年時，抗-HBs效價無明顯改變，在（24±1）℃存放1年半時，抗-HBs效價平均下降 32.8%，在（37±1）℃存放3個月后，抗-HBs效價開始明顯降低。表1 HBIG在不同放置條件下的抗-HBs效價
2．1．2 抗-TT效價 破傷風人免疫球蛋白的抗-TT效價在不同放置條件下的變化結果，結果顯示，該制品在（6±2）℃存放1年時，破傷風抗體效價無明顯改變；在（25±2）℃存放半年時，破傷風抗體效價平均下降10.41%。
2．2 IgG單體加雙體 特異性人免疫球蛋白中的IgG易于聚合，其中HBIG在2℃～8℃存放3年后，IgG單體加雙體平均下降了1.26%；TIG在（6±2）℃存放1年后，IgG單體加雙體平均下降了1.14%。但上述兩種制品在（24±1）℃存放6個月后單體加雙體的總和開始明顯下降，其變化情況分別 TIG在不同放置條件下的抗-TT效價表3 HBIG IgG單體加雙體在不同條件下放置后的變化表4 TIG IgG單體加雙體在不同條件下放置后的變化
2．3 蛋白質含量及純度 HBIG、TIG蛋白質含量及純度的穩(wěn)定性分別。從中的情況反映出，HBIG樣品在不同溫度下［2℃～8℃、（24±1）℃、（37±1）℃］分別放置1年、2年及3年時，TIG樣品在（6±2）℃和（25±2）℃下分別放置半年和1年時，蛋白質含量和純度基本上沒有發(fā)生改變，均說明這兩項指標較為穩(wěn)定。 表5 HBIG不同放置條件蛋白質含量變化情況 表6 HBIG不同放置條件下蛋白質純度變化表7 TIG不同放置條件蛋白質含量變化情況表8 TIG不同放置條件下蛋白質純度變化
3 討論
生物制品穩(wěn)定性試驗，長期以來大多采用留樣觀察法，此法是在不同溫度下放置考察藥物制劑的穩(wěn)定性，是考察藥物穩(wěn)定性的最可靠方法，能準確真實地反映制品穩(wěn)定性的實際情況。本文進行的穩(wěn)定性試驗的方法依據《中華人民共和國藥典》2005年版附錄ⅪⅩC“原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導原則”，在人免疫球蛋白、靜注人免疫球蛋白（pH 4）穩(wěn)定性試驗的基礎上，試驗樣品在（25±2）℃條件下放置6個月進行加速穩(wěn)定性試驗，在（6±2）℃條件下放置12個月、18個月、36個月進行長期試驗，分別檢測特異性人免疫球蛋白樣品外觀、pH值、抗體效價、純度、蛋白質含量、IgG單體加雙體、無菌檢查、熱原質檢查等多項指標，以觀察其理化及生物學活性的變化情況，為確定此產品的有效期。
特異性人免疫球蛋白有別于其他藥物制劑，其分子量為15萬左右，因其作用成分為蛋白質，易受各種物理或化學因素的影響而出現裂解、聚合、變性等變化，造成其生物學功能下降或損失，從而使療效降低甚至失效，因此應用上述方法進行特異性人免疫球蛋白穩(wěn)定性觀察，對制品有效期的確定也僅是提供參考數據。其有效期確定還應以常規(guī)留樣觀察法測定的穩(wěn)定性結果作為主要依據。