傳染病學(xué)指導(dǎo):臨床基因診斷淋球菌的注意事項(xiàng)

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目前臨床檢測淋球菌的基因診斷方法主要采用PCR方法,但是該方法在臨床檢測中應(yīng)注意幾個(gè)問題。
    (1)引物設(shè)計(jì)除了以上所列的淋球菌PCR引物外,還可從在其它基因上設(shè)計(jì),但是引物序列應(yīng)具有特異性。因?yàn)榧?xì)菌的染色體較大,許多基因序列并沒有搞清楚;同時(shí)細(xì)菌之間或近或遠(yuǎn)有一定的同源性,而且細(xì)菌所含質(zhì)粒序列間也存在同源性,因此設(shè)計(jì)引物一定要進(jìn)行基因數(shù)據(jù)庫比較分析,同時(shí)進(jìn)行特異性和靈敏性實(shí)驗(yàn),從中選擇引物進(jìn)行臨床檢測。
    (2)臨床標(biāo)本處理對臨床標(biāo)本來講,PCR模板要求越純越好。這就要求在采集標(biāo)本時(shí)要取到準(zhǔn)確的位置,對于無癥狀患者要適當(dāng)多采樣,以保證采集到病原體細(xì)菌。另外由于臨床標(biāo)本成分比較復(fù)雜,有時(shí)簡單處理的標(biāo)本PCR擴(kuò)增效果并不理想,這可能是由于雜質(zhì)過多造成的,需要進(jìn)一步純化,如用酚一氯仿抽提法純化,結(jié)果將會(huì)好轉(zhuǎn)。這種純化方法比較麻煩,目前已有商品化的DNA純化試劑盒,可以較簡便地從臨床標(biāo)本中提取高純度的DNA.
    (3)PCR產(chǎn)物的檢測方法不久以前臨床PCR檢測淋球菌幾乎都采用電泳的方法進(jìn)行PCR產(chǎn)物的鑒定。該方法存在許多問題,如由于肉眼觀察的主觀性而造成假陽性和假陰性的結(jié)果。目前用雜交顯色法代替電泳法,提高了結(jié)果判斷的特異性和靈敏性。
    總之,PCR方法與LCP方法比傳統(tǒng)的培養(yǎng)法在靈敏性和特異性上有了很大的提高,時(shí)間也大大縮短。隨著基因診斷技術(shù)的不斷改進(jìn)。PCR方法與LCP方法在淋球菌的檢測將會(huì)成為常規(guī)的檢測方法。