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(一) 保留時間變化
1.柱溫變化：柱恒溫；
2.等度與梯度間未能充分平衡：至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
3.緩沖液容量不夠：用>25mmol/L的緩沖液
4.柱污染：每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化：穩(wěn)定進樣條件,調(diào)節(jié)流動相
6.柱快達到壽命：采用保護柱
(二)保留時間縮短
1.流速增加：檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載：降低樣品量
3.鍵合相流失：流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向
4.流動相組成變化：防止流動相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加：柱恒溫
(三)保留時間延長
1.流速下降：管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
2.硅膠柱上活性點變化：用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失：同前(二)3
4.流動相組成變化：同前(二)4
5.溫度降低：同前(二)5
(四) 出現(xiàn)肩峰或分叉
1.樣品體積過大：用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%
2.樣品溶劑過強：采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效：更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
5.進樣器損壞：更換進樣器轉(zhuǎn)子
(五)鬼峰
1.進樣閥殘余峰：每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物：處理樣品
3.柱未平衡：重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)：每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相)：通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水
(六) 基線噪聲
1.氣泡(尖銳峰)：流動相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機噪聲)：清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑
3.檢測器燈連續(xù)噪聲：更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲)：采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)
5.檢測器中有氣泡：流動相脫氣,加柱后背壓
(七)峰拖尾
1.柱超載：降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾：清潔樣品,調(diào)整流動相
3.硅羥基作用：加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品
4.同前(四)4：同前(四)4
5.同前(四)3：同前(四)3
6.死體積或柱外體積過大：連接點降至最低,對所有連接點作合適調(diào)整,盡可能采用細內(nèi)徑的連接管
7.柱效下降：用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱
(八)峰展寬
1.進樣體積過大：同(四)1
2.在進樣閥中造成峰擴展：進樣前后排出氣泡以降低擴散
3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢：設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點
4.檢測器時間常數(shù)過大：設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%
5.流動相粘度過高：增加柱溫,采用低粘度流動相
6.檢測池體積過大：用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時間過長：等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過大：將連接管徑和連接管長度降至最小
9.樣品過載：進小濃度小體積樣品
(一) 保留時間變化
1.柱溫變化：柱恒溫；
2.等度與梯度間未能充分平衡：至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
3.緩沖液容量不夠：用>25mmol/L的緩沖液
4.柱污染：每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化：穩(wěn)定進樣條件,調(diào)節(jié)流動相
6.柱快達到壽命：采用保護柱
(二)保留時間縮短
1.流速增加：檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載：降低樣品量
3.鍵合相流失：流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向
4.流動相組成變化：防止流動相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加：柱恒溫
(三)保留時間延長
1.流速下降：管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
2.硅膠柱上活性點變化：用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失：同前(二)3
4.流動相組成變化：同前(二)4
5.溫度降低：同前(二)5
(四) 出現(xiàn)肩峰或分叉
1.樣品體積過大：用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%
2.樣品溶劑過強：采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效：更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
5.進樣器損壞：更換進樣器轉(zhuǎn)子
(五)鬼峰
1.進樣閥殘余峰：每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物：處理樣品
3.柱未平衡：重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)：每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相)：通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水
(六) 基線噪聲
1.氣泡(尖銳峰)：流動相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機噪聲)：清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑
3.檢測器燈連續(xù)噪聲：更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲)：采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)
5.檢測器中有氣泡：流動相脫氣,加柱后背壓
(七)峰拖尾
1.柱超載：降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾：清潔樣品,調(diào)整流動相
3.硅羥基作用：加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品
4.同前(四)4：同前(四)4
5.同前(四)3：同前(四)3
6.死體積或柱外體積過大：連接點降至最低,對所有連接點作合適調(diào)整,盡可能采用細內(nèi)徑的連接管
7.柱效下降：用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱
(八)峰展寬
1.進樣體積過大：同(四)1
2.在進樣閥中造成峰擴展：進樣前后排出氣泡以降低擴散
3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢：設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點
4.檢測器時間常數(shù)過大：設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%
5.流動相粘度過高：增加柱溫,采用低粘度流動相
6.檢測池體積過大：用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時間過長：等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過大：將連接管徑和連接管長度降至最小
9.樣品過載：進小濃度小體積樣品