C. 藥材及成方制劑顯微鑒別法
顯微鑒別系指用顯微鏡對藥材的切片、粉末、解離組織或表面制片及成方制劑中藥味的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的一種方法。鑒別時(shí)選擇有代表性的樣品，根據(jù)各該藥材鑒別項(xiàng)的規(guī)定制片。成方制劑根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制片。
一、橫切片或縱切片：選取藥材適當(dāng)部位，軟化后用徒手或滑走切片法，切成10～20μm的薄片,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它試液處理后觀察。必要時(shí)可包埋后切片。
二、粉末制片：取粉末少量，置載玻片上，攤平，選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它適當(dāng)試液處理后觀察。
三、表面制片：將樣品濕潤軟化后,切取一部分或撕取其表皮,加適宜的試液觀察。
四、解離組織片：如樣品中薄壁組織占大部分，木化組織少或分散存在，可用氫氧化鉀法；如果品堅(jiān)硬，木化組織較多或集成較大群束，可用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在解離前，應(yīng)先將樣品切成寬或厚約2mm的小條或片。
1．氫氧化鉀法
置樣品于試管中，加5％氫氧化鉀溶液適量，加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去堿液，加水洗滌后，取出少量置載玻片上，用解剖針?biāo)洪_，以稀甘油裝置觀察。
2．硝鉻酸法
置樣品于試管中,加硝鉻酸試液適量，放置，至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去酸液，加水洗滌后，照1．法操作裝置。
3．氯酸鉀法
置樣品于試管中，加硝酸溶液(1→2)及氯酸鉀少量,緩緩加熱，待產(chǎn)生的氣泡漸少時(shí)，再及時(shí)加入氯酸鉀少量，以維持氣泡穩(wěn)定地發(fā)生，至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去酸液，加水洗滌后，照1．法操作裝置。
五、花粉粒與孢子制片：取花粉、花藥（或小的花朵）或孢子囊群（干燥樣品浸于冰醋酸中軟化），用玻璃棒搗碎，過濾于離心管中，離心，取沉淀加新鮮配制的醋酐與硫酸(9∶1)的混合液1～3ml，置水浴上加熱2～3分鐘，離心，取沉淀，用水洗滌2次,加50％甘油與1％苯酚3～4滴,用品紅甘油膠封藏觀察。也可用水合氯醛試液裝置觀察。
六、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物等的測量：在顯微鏡下測量細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物等的大小，可用目鏡測微尺測量。先將目鏡測微尺裝入目鏡內(nèi)，用鏡臺測微尺標(biāo)化。標(biāo)化時(shí)，轉(zhuǎn)動目鏡，移動鏡臺測微尺，使兩種量尺的刻度平行，左邊的“0” 刻度重合，再找第二條重合刻度。根據(jù)兩條重合刻度間兩種量尺的小格數(shù)，計(jì)算出目鏡測微尺每小格在該物鏡條件下所相當(dāng)?shù)拇笮。é蘭）。測量時(shí),以目鏡測微尺測量目的物的小格數(shù)，乘以每一小格的大小(μm)。通常是在高倍物鏡下進(jìn)行，但欲測量較長的如纖維、非腺毛等的長度時(shí),則以在低倍物鏡下測量較為方便。記錄值與最小值（μm）,可允許有少量略高或略低于藥典規(guī)定的數(shù)值。
七、細(xì)胞壁性質(zhì)的檢定：
1．木質(zhì)化細(xì)胞壁
加間苯三酚試液1～2滴，稍放置，加鹽酸1滴,因木化程度不同,顯紅色或紫紅色。
2．木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁
加蘇丹Ⅲ試液，稍放置或微熱，顯橘紅色至紅色。
3．纖維素細(xì)胞壁
加氯化鋅碘試液；或先加碘試液濕潤后，稍放置,再加硫酸溶液(33→50)；顯藍(lán)色或紫色。
4．硅質(zhì)化細(xì)胞壁
加硫酸無變化。
八、細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)的檢定：
1．淀粉粒
（1）加碘試液，顯藍(lán)色或紫色。
（2）用甘油醋酸試液裝置，置偏光顯微鏡下觀察,未糊化的淀粉粒顯偏光現(xiàn)象；已糊化的無偏光現(xiàn)象。
2．糊粉粒
（1）加碘試液，顯棕色或黃棕色。
（2）加硝酸汞試液,顯磚紅色。材料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脫脂后進(jìn)行試驗(yàn)。
3．脂肪油、揮發(fā)油或樹脂（1）加蘇丹Ⅲ試液，顯橘紅色、紅色或紫紅色。
（2）加90％乙醇，脂肪油不溶解（篦麻油及巴豆油例外），揮發(fā)油則溶解。
4．菊糖
加10％α－萘酚乙醇溶液，再加硫酸，顯紫紅色并很快溶解。
5．粘液
加釕紅試液，顯紅色。
6．草酸鈣結(jié)晶（1）加稀醋酸不溶解，加稀鹽酸溶解而無氣泡發(fā)生。
（2）加硫酸溶液（1→2），逐漸溶解，片刻后析出針狀硫酸鈣結(jié)晶。
7．碳酸鈣（鐘乳體）
加稀鹽酸溶解，同時(shí)有氣泡發(fā)生。
8．硅質(zhì)
加硫酸不溶解。
九、鑒別由粉末藥材制成的成方制劑時(shí)，散劑照上述粉末制片法制片；丸劑、片劑等，可取2～3丸（片）研細(xì)后，取少量樣品，滴加規(guī)定的試液，攪拌均勻，使粘結(jié)的細(xì)胞、組織散離，再按粉末特征進(jìn)行鑒別；蜜丸可直接挑取少量樣品制片，或酌用熱水脫蜜后制片觀察。
附：顯微試液配制法
三氯化鐵試液
取三氯化鐵1g，加水使溶解成100ml，即得。
水合氯醛試液（見附錄ⅩⅤ Ｂ）。
甘油醋酸試液
取甘油、醋酸及水各等份，混勻，即得。
蘇丹Ⅲ試液
（見附錄ⅩⅤ Ｂ）。
釕紅試液
取10％醋酸鈉溶液1～2ml，加釕紅適量使呈酒紅色，即得。
本液應(yīng)臨用新制。
間苯三酚試液
取間苯三酚1g，加90％乙醇100ml使溶解，濾過，即得。
本液應(yīng)置棕色玻璃瓶內(nèi)，在暗處保存。
組織解離液
（1）取硝酸10ml，加入100ml水中，混勻。 （2） 取鉻酸10g，加水100ml使溶解。用時(shí)將二液等量混合，即得。
品紅甘油膠
取動物膠1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加熱并輕輕攪拌至完全混勻，用紗布濾于培養(yǎng)皿內(nèi)，加堿性品紅溶液(堿性品紅0.1g，加無水乙醇600ml及樟油80ml，溶解)適量，混勻，凝固后即得。
α－萘酚試液
取15％的α－萘酚乙醇溶液10.5ml,緩緩加硫酸6.5ml，混勻后再加乙醇40.5ml及水4ml，混勻，即得。
銅氨試液
取碳酸銅0.5g，加水適量，置乳體中研磨，再加濃氨溶液10ml使溶解，即得。
硝酸汞試液
取汞4.5g ，加發(fā)煙硝酸3ml，俟作用完畢，加等量水稀釋，即得。
本液應(yīng)置棕色玻璃塞瓶內(nèi)，在暗處保存。
氯化鋅碘試液
取碘化鉀8g，加水8.5ml使溶解,再加無水氯化鋅2.5g使溶解，加碘適量至飽和，即得。
本液應(yīng)置棕色玻璃塞瓶內(nèi)保存。
顯微鑒別系指用顯微鏡對藥材的切片、粉末、解離組織或表面制片及成方制劑中藥味的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的一種方法。鑒別時(shí)選擇有代表性的樣品，根據(jù)各該藥材鑒別項(xiàng)的規(guī)定制片。成方制劑根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制片。
一、橫切片或縱切片：選取藥材適當(dāng)部位，軟化后用徒手或滑走切片法，切成10～20μm的薄片,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它試液處理后觀察。必要時(shí)可包埋后切片。
二、粉末制片：取粉末少量，置載玻片上，攤平，選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它適當(dāng)試液處理后觀察。
三、表面制片：將樣品濕潤軟化后,切取一部分或撕取其表皮,加適宜的試液觀察。
四、解離組織片：如樣品中薄壁組織占大部分，木化組織少或分散存在，可用氫氧化鉀法；如果品堅(jiān)硬，木化組織較多或集成較大群束，可用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在解離前，應(yīng)先將樣品切成寬或厚約2mm的小條或片。
1．氫氧化鉀法
置樣品于試管中，加5％氫氧化鉀溶液適量，加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去堿液，加水洗滌后，取出少量置載玻片上，用解剖針?biāo)洪_，以稀甘油裝置觀察。
2．硝鉻酸法
置樣品于試管中,加硝鉻酸試液適量，放置，至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去酸液，加水洗滌后，照1．法操作裝置。
3．氯酸鉀法
置樣品于試管中，加硝酸溶液(1→2)及氯酸鉀少量,緩緩加熱，待產(chǎn)生的氣泡漸少時(shí)，再及時(shí)加入氯酸鉀少量，以維持氣泡穩(wěn)定地發(fā)生，至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去酸液，加水洗滌后，照1．法操作裝置。
五、花粉粒與孢子制片：取花粉、花藥（或小的花朵）或孢子囊群（干燥樣品浸于冰醋酸中軟化），用玻璃棒搗碎，過濾于離心管中，離心，取沉淀加新鮮配制的醋酐與硫酸(9∶1)的混合液1～3ml，置水浴上加熱2～3分鐘，離心，取沉淀，用水洗滌2次,加50％甘油與1％苯酚3～4滴,用品紅甘油膠封藏觀察。也可用水合氯醛試液裝置觀察。
六、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物等的測量：在顯微鏡下測量細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物等的大小，可用目鏡測微尺測量。先將目鏡測微尺裝入目鏡內(nèi)，用鏡臺測微尺標(biāo)化。標(biāo)化時(shí)，轉(zhuǎn)動目鏡，移動鏡臺測微尺，使兩種量尺的刻度平行，左邊的“0” 刻度重合，再找第二條重合刻度。根據(jù)兩條重合刻度間兩種量尺的小格數(shù)，計(jì)算出目鏡測微尺每小格在該物鏡條件下所相當(dāng)?shù)拇笮。é蘭）。測量時(shí),以目鏡測微尺測量目的物的小格數(shù)，乘以每一小格的大小(μm)。通常是在高倍物鏡下進(jìn)行，但欲測量較長的如纖維、非腺毛等的長度時(shí),則以在低倍物鏡下測量較為方便。記錄值與最小值（μm）,可允許有少量略高或略低于藥典規(guī)定的數(shù)值。
七、細(xì)胞壁性質(zhì)的檢定：
1．木質(zhì)化細(xì)胞壁
加間苯三酚試液1～2滴，稍放置，加鹽酸1滴,因木化程度不同,顯紅色或紫紅色。
2．木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁
加蘇丹Ⅲ試液，稍放置或微熱，顯橘紅色至紅色。
3．纖維素細(xì)胞壁
加氯化鋅碘試液；或先加碘試液濕潤后，稍放置,再加硫酸溶液(33→50)；顯藍(lán)色或紫色。
4．硅質(zhì)化細(xì)胞壁
加硫酸無變化。
八、細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)的檢定：
1．淀粉粒
（1）加碘試液，顯藍(lán)色或紫色。
（2）用甘油醋酸試液裝置，置偏光顯微鏡下觀察,未糊化的淀粉粒顯偏光現(xiàn)象；已糊化的無偏光現(xiàn)象。
2．糊粉粒
（1）加碘試液，顯棕色或黃棕色。
（2）加硝酸汞試液,顯磚紅色。材料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脫脂后進(jìn)行試驗(yàn)。
3．脂肪油、揮發(fā)油或樹脂（1）加蘇丹Ⅲ試液，顯橘紅色、紅色或紫紅色。
（2）加90％乙醇，脂肪油不溶解（篦麻油及巴豆油例外），揮發(fā)油則溶解。
4．菊糖
加10％α－萘酚乙醇溶液，再加硫酸，顯紫紅色并很快溶解。
5．粘液
加釕紅試液，顯紅色。
6．草酸鈣結(jié)晶（1）加稀醋酸不溶解，加稀鹽酸溶解而無氣泡發(fā)生。
（2）加硫酸溶液（1→2），逐漸溶解，片刻后析出針狀硫酸鈣結(jié)晶。
7．碳酸鈣（鐘乳體）
加稀鹽酸溶解，同時(shí)有氣泡發(fā)生。
8．硅質(zhì)
加硫酸不溶解。
九、鑒別由粉末藥材制成的成方制劑時(shí)，散劑照上述粉末制片法制片；丸劑、片劑等，可取2～3丸（片）研細(xì)后，取少量樣品，滴加規(guī)定的試液，攪拌均勻，使粘結(jié)的細(xì)胞、組織散離，再按粉末特征進(jìn)行鑒別；蜜丸可直接挑取少量樣品制片，或酌用熱水脫蜜后制片觀察。
附：顯微試液配制法
三氯化鐵試液
取三氯化鐵1g，加水使溶解成100ml，即得。
水合氯醛試液（見附錄ⅩⅤ Ｂ）。
甘油醋酸試液
取甘油、醋酸及水各等份，混勻，即得。
蘇丹Ⅲ試液
（見附錄ⅩⅤ Ｂ）。
釕紅試液
取10％醋酸鈉溶液1～2ml，加釕紅適量使呈酒紅色，即得。
本液應(yīng)臨用新制。
間苯三酚試液
取間苯三酚1g，加90％乙醇100ml使溶解，濾過，即得。
本液應(yīng)置棕色玻璃瓶內(nèi)，在暗處保存。
組織解離液
（1）取硝酸10ml，加入100ml水中，混勻。 （2） 取鉻酸10g，加水100ml使溶解。用時(shí)將二液等量混合，即得。
品紅甘油膠
取動物膠1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加熱并輕輕攪拌至完全混勻，用紗布濾于培養(yǎng)皿內(nèi)，加堿性品紅溶液(堿性品紅0.1g，加無水乙醇600ml及樟油80ml，溶解)適量，混勻，凝固后即得。
α－萘酚試液
取15％的α－萘酚乙醇溶液10.5ml,緩緩加硫酸6.5ml，混勻后再加乙醇40.5ml及水4ml，混勻，即得。
銅氨試液
取碳酸銅0.5g，加水適量，置乳體中研磨，再加濃氨溶液10ml使溶解，即得。
硝酸汞試液
取汞4.5g ，加發(fā)煙硝酸3ml，俟作用完畢，加等量水稀釋，即得。
本液應(yīng)置棕色玻璃塞瓶內(nèi)，在暗處保存。
氯化鋅碘試液
取碘化鉀8g，加水8.5ml使溶解,再加無水氯化鋅2.5g使溶解，加碘適量至飽和，即得。
本液應(yīng)置棕色玻璃塞瓶內(nèi)保存。