免疫分析中常用的熒光染料與標記染色

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(一)免疫熒光標記最常用的熒光染料
    最常用的染料有FITC和藻紅蛋白類(PE)及羅丹明等。
    FITC(異硫氰酸熒光素):綠色530nm
    PE(藻紅蛋白):橙黃色575nm
    PerCP(多甲藻黃素葉綠素蛋白):深紅色675nm
    PI(碘化丙啶):橙紅色620nm
    488nm波長的氬離子激光激發(fā)
    APC(別藻青蛋白):紅色660nm
    630nm波長的氦氖激光或紅色二極管激光激發(fā)
    (二)免疫熒光標記
    常用的標記染色為直接免疫熒光染色和間接免疫熒光染色。在進行雙參數(shù)或多參數(shù)分析時,常常需要進行熒光抗體的組合標記,目前已經有雙色、三色以及四色標記。
    (三)細胞自發(fā)熒光
    自發(fā)熒光信號為噪聲信號,在多數(shù)情況下會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。在免疫細胞化學等測量中,對于結合水平不高的熒光抗體來說,如何提高信噪比是個關鍵。一般說來,細胞成分中能夠產生自發(fā)熒光的分子(例如核黃素、細胞色素等)的含量越高,自發(fā)熒光越強;培養(yǎng)細胞中死細胞/活細胞比例越高,自發(fā)熒光越強;細胞樣品中所含亮細胞的比例越高,自發(fā)熒光越強。