【摘要】目的尋找一種防止口腔癌前損害癌變的藥物。方法用1023合劑(由黃芪、絞股藍、川芎和含硒綠茶組成)對倉鼠頰囊的實驗性口腔癌前損害和癌進行了抑瘤、阻癌研究，在對動物涂擦二甲基苯蒽(DMBA)的同時，用1023中藥合劑灌胃。
結(jié)果1023合劑用藥組的倉鼠腫瘤的發(fā)生比對照組推遲了12天;其異常增生和癌的發(fā)生率明顯低于對照組(P<0.01)。結(jié)論1023合劑確有抑瘤、阻癌功效。通過正交實驗分析發(fā)現(xiàn)，其抑瘤、阻癌的佳配方為A2B2C2D1。
【關(guān)鍵詞】中藥配伍腫瘤，實驗性動物，實驗
現(xiàn)有研究表明，口腔癌前損害既可向前發(fā)展為癌，又可逆轉(zhuǎn)為良性損害乃至愈合，還可長期處于穩(wěn)定不變的狀態(tài)。鑒于此，許多研究者試圖尋找一種能有效阻止癌前損害癌變的藥物。我們用自行研制的1023合劑(是由黃氏、絞股藍、川芎和含硒綠茶4種中草藥組成的中藥煎劑)在制備倉鼠頰囊癌前損害和癌模型的同時給予灌胃治療，以觀察其抑瘤、防癌和阻癌的作用。
材料和方法
一、藥物的篩選與組成
我們查閱了大量中醫(yī)藥文獻，從目前現(xiàn)有的研究中認為具有健身、增強免疫功能和防癌的許多中草藥[1]中，按中藥配伍原則，兼顧多方面的協(xié)同作用，篩選4種中藥組成1023(分別代表黃芪、絞股藍、川芎和含硒綠茶，因正式動物實驗的日期是10月23日，故取名1023)合劑。
二、藥物的制備
按傳統(tǒng)的中草藥炮制方法，將4種藥物分別煎制，每味藥分別以1∶7、1∶5和1∶3加水煎3次(煎制時間參照中藥藥典)，后濃縮成1∶1和1∶2兩種濃度，按正交設(shè)計(表1)將4種藥物按2個濃度水平組成8組，每組5只動物。
三、實驗性癌前損害和癌的動物模型制備
1. 動物來源：購于武漢市生物制品所，為敘利亞金黃地鼠(亦稱倉鼠)。
2. 動物分組：雄性倉鼠115只，均為7～8周齡，體重75～95g，平均體重83.9g，分為5組。1組：40只倉鼠，雙側(cè)頰囊涂擦0.5%DMBA丙酮液，吹干后，每只動物用灌胃針頭灌入1023煎液1ml，其用量參照中藥藥典人的用量折數(shù)而來。每周實驗3次，連續(xù)12周。2組：55只倉鼠，雙側(cè)頰囊涂擦0.5%的DMBA，8周后留12只動物繼續(xù)涂藥至12周，其余動物留作他用。3組：5只倉鼠，雙側(cè)頰囊涂丙酮液，灌蒸餾水1ml.4組：5只倉鼠，雙側(cè)頰囊涂丙酮液。5組：10只倉鼠，作為空白對照。
四、觀察內(nèi)容
1. 肉眼觀察：每只倉鼠均編號，詳細記錄每次實驗前糜爛、潰瘍、增厚、粗糙、白色斑片或斑塊、腫瘤及新生物等情況。
2. 病理切片觀察：1、2組動物在實驗4、6周時取1/6的實驗組織、8周時取1/2的實驗組織、12周時取全部實驗組織活檢觀察。
結(jié)果
一、白色斑片出現(xiàn)的時間及發(fā)生率
1、2組在白色斑片出現(xiàn)的時間及發(fā)生率上無明顯差異，均在實驗第3周開始出現(xiàn)，至第6周時分別達95%和100%.
二、腫瘤出現(xiàn)的時間及發(fā)生率
1. 1、2組動物的比較：2組于實驗第6周初開始長出腫瘤，而1組于實驗第7周末才出現(xiàn)腫瘤，1組比2組腫瘤出現(xiàn)時間晚12d.第8周時，1組動物僅3個實驗部位出現(xiàn)腫瘤，占4.3%;而2組有17.1%的實驗部位長出腫瘤，兩組間差異有高度顯著性(P<0.01)。12周時，1組的腫瘤發(fā)生率為46.7%，而2組則達100%，二者差異仍有高度顯著性(P<0.01)。
2. 1組正交設(shè)計的統(tǒng)計分析：為了挑選抑制腫瘤發(fā)生的佳配方，我們采用直觀法對實驗12周時各組的非瘤發(fā)生率進行了統(tǒng)計分析(表1)。結(jié)果表明，在A(黃芪)、B(絞股藍)、C(川芎)、D(含硒綠茶)4個主因素中，B、D的絕對值大且相同，說明B、D的即期作用大。從藥物的兩個濃度水平的作用來分析，B2>B1，D1>D2.從交互效應(yīng)分析，雖然A藥和C藥不如B大，但A×C的交互效應(yīng)卻很大，D值為-33(以絕對值計)。交互效應(yīng)的分析表明，A1C1和A2C2的交互效應(yīng)強(y值都是66.25)。由此得出抑制腫瘤發(fā)生或阻止腫瘤發(fā)生的佳配方應(yīng)是A1B2C1D1或A2B2C2D1。
·
三、活檢結(jié)果分析
1. 1、2組不典型增生的比較：實驗第4周1、2組均檢出有不典型增生，2組(38.5%)高于1組(16.7%)，但無統(tǒng)計學意義。6周時2組不典型增生檢出率為58.3%，而第1組僅為16.7%，二者差異有顯著性(P<0.05)。8周時2組的不典型增生為74.3%，1組為48.6%，差異仍有顯著性(P<0.05)。如果將癌和不典型增生均計為不良增生，則2組的不良增生率為88.6%，1組為54.2%，二者差異有高度顯著性(P<0.01)。實驗12周的全部活檢結(jié)果表明，2組的癌變率為66.7%，而1組為35.0%，二者差異有高度顯著性(P<0.01)。
2. 1組實驗12周時的正交設(shè)計分析：為了篩選阻止癌發(fā)生的佳配方，我們對12周時的非癌發(fā)生率進行了正交分析(表2)，結(jié)果表明，A、B、C、D4個主因素中，以B的主效應(yīng)作用大(D值大)，且B2的作用大于B1.A、C兩因素的單獨效應(yīng)不及B，但A×C的交互效應(yīng)大(D值的絕對值大)，并以A2×C2的交互效應(yīng)為佳。D在分析中不作為主效應(yīng)，但從兩個水平比較看，D1作用較大，故阻止癌變或抑制癌發(fā)生的佳配方應(yīng)是A2B2C2D1，這與前文抑瘤分析的結(jié)果相似。
討論
目前對口腔癌前疾病的治療尚缺乏有效的藥物，對癌前損害癌變的阻斷研究是近年來的熱點課題，其中尤以對中草藥防癌、阻癌的研究居多[2]。本組結(jié)果表明，肉眼觀，用1023合劑的1組動物腫瘤發(fā)生的時間推遲了12天，實驗8周和12周腫瘤的發(fā)生率顯著低于2組(P<0.01)。病理結(jié)果同樣證實，8周時不典型增生率1組明顯低于2組(P<0.05)，12周時癌的發(fā)生率1組顯著低于2組(P<0.01)。
這些結(jié)果均提示，1023合劑可以抑制腫瘤的發(fā)生，降低異常增生(癌前病變)和癌的發(fā)生率，具有防癌、阻癌的作用。
為了篩選理想的配方，我們對4種藥物各按2種濃度水平進行了正交設(shè)計實驗，以期發(fā)現(xiàn)主效應(yīng)藥物和交互效應(yīng)作用。通過綜合分析后證實，A1B2C1D1和A2B2C2D1為佳配伍，其抑瘤效果佳。對阻止癌變發(fā)生的非癌發(fā)生率的正交設(shè)計分析表明，阻癌的佳配方是A2B2C2D1，與抑瘤生成的佳配方之一相同。此結(jié)果提示：①B起主效應(yīng)作用，A×C配伍增效顯著，D亦有重要作用。②抑瘤和阻癌的佳配方相同，說明其作用機理相似。
我們選擇4種中草藥組成1023合劑，符合中醫(yī)配伍原則和藥物配伍增效互補機理，按現(xiàn)代醫(yī)學理論研究結(jié)果，該合劑中的黃芪[3]、絞股藍[4]二藥有增強免疫系統(tǒng)綜合功能的作用，而且黃芪具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用。提示該藥的抑瘤、防癌效果可能是通過增強和穩(wěn)定機體的免疫功能而實現(xiàn)的。絞股藍具有抗腫瘤和促使癌細胞逆轉(zhuǎn)到正常的作用。從正交設(shè)計分析中看，在抑瘤和阻癌中絞股藍都是主效應(yīng)藥物，此實驗進一步說明絞股藍對阻止癌變有重要作用。川芎能活血、理血、改善血液循環(huán)，使藥物能更有效地發(fā)揮作用。與具有補氣的黃芪合用，還可起到活氣活血的作用，且二者的交互效應(yīng)強，說明二者一起應(yīng)用具有增強作用。綠茶有抗突變作用[5]，硒有抑瘤作用[6]，用含硒綠茶則兩種作用兼?zhèn)洌狙芯勘砻骶G茶亦是主效應(yīng)藥物，能起到抑瘤作用。因此，此合劑無論是在傳統(tǒng)的中醫(yī)理論上，還是在現(xiàn)代醫(yī)學理論上都是較為合理的配方，且對動物無任何毒副作用，藥源豐富，是一種很有研究潛力的防癌、阻癌或健身防癌的保健新藥。
參考文獻
1.靖士俠，郝俊芳，潘洪城，等?？拱┲兴幖疤烊凰幬镉行С煞盅芯窟M展。中國醫(yī)藥學雜志，1991，26：72-76.
2.解京豐，章魁華，秦錦霞，等。實驗性口腔粘膜癌前病變阻斷后的*鼠移植。中華口腔醫(yī)學雜志，1989，24：273-275.
3.杜志德，來玉梅。黃芪的免疫作用研究進展。中草藥，1988，19：40-42.
4.鐘余才。絞股藍藥用研究進展。廣西中醫(yī)藥，1991，14：138-139.
5.阮萃才，梁遠，劉宗河。茶葉的抗突變作用。廣西醫(yī)學院學報，1988，5：27-30.
6.顏學先，王鼎年。硒與腫瘤Ⅲ、植瘤小鼠給抑瘤劑量硒后胞漿中75Se的分布與含硒量蛋白變化。重慶醫(yī)科大學學報，1989，14：85-89.
結(jié)果1023合劑用藥組的倉鼠腫瘤的發(fā)生比對照組推遲了12天;其異常增生和癌的發(fā)生率明顯低于對照組(P<0.01)。結(jié)論1023合劑確有抑瘤、阻癌功效。通過正交實驗分析發(fā)現(xiàn)，其抑瘤、阻癌的佳配方為A2B2C2D1。
【關(guān)鍵詞】中藥配伍腫瘤，實驗性動物，實驗
現(xiàn)有研究表明，口腔癌前損害既可向前發(fā)展為癌，又可逆轉(zhuǎn)為良性損害乃至愈合，還可長期處于穩(wěn)定不變的狀態(tài)。鑒于此，許多研究者試圖尋找一種能有效阻止癌前損害癌變的藥物。我們用自行研制的1023合劑(是由黃氏、絞股藍、川芎和含硒綠茶4種中草藥組成的中藥煎劑)在制備倉鼠頰囊癌前損害和癌模型的同時給予灌胃治療，以觀察其抑瘤、防癌和阻癌的作用。
材料和方法
一、藥物的篩選與組成
我們查閱了大量中醫(yī)藥文獻，從目前現(xiàn)有的研究中認為具有健身、增強免疫功能和防癌的許多中草藥[1]中，按中藥配伍原則，兼顧多方面的協(xié)同作用，篩選4種中藥組成1023(分別代表黃芪、絞股藍、川芎和含硒綠茶，因正式動物實驗的日期是10月23日，故取名1023)合劑。
二、藥物的制備
按傳統(tǒng)的中草藥炮制方法，將4種藥物分別煎制，每味藥分別以1∶7、1∶5和1∶3加水煎3次(煎制時間參照中藥藥典)，后濃縮成1∶1和1∶2兩種濃度，按正交設(shè)計(表1)將4種藥物按2個濃度水平組成8組，每組5只動物。
三、實驗性癌前損害和癌的動物模型制備
1. 動物來源：購于武漢市生物制品所，為敘利亞金黃地鼠(亦稱倉鼠)。
2. 動物分組：雄性倉鼠115只，均為7～8周齡，體重75～95g，平均體重83.9g，分為5組。1組：40只倉鼠，雙側(cè)頰囊涂擦0.5%DMBA丙酮液，吹干后，每只動物用灌胃針頭灌入1023煎液1ml，其用量參照中藥藥典人的用量折數(shù)而來。每周實驗3次，連續(xù)12周。2組：55只倉鼠，雙側(cè)頰囊涂擦0.5%的DMBA，8周后留12只動物繼續(xù)涂藥至12周，其余動物留作他用。3組：5只倉鼠，雙側(cè)頰囊涂丙酮液，灌蒸餾水1ml.4組：5只倉鼠，雙側(cè)頰囊涂丙酮液。5組：10只倉鼠，作為空白對照。
四、觀察內(nèi)容
1. 肉眼觀察：每只倉鼠均編號，詳細記錄每次實驗前糜爛、潰瘍、增厚、粗糙、白色斑片或斑塊、腫瘤及新生物等情況。
2. 病理切片觀察：1、2組動物在實驗4、6周時取1/6的實驗組織、8周時取1/2的實驗組織、12周時取全部實驗組織活檢觀察。
結(jié)果
一、白色斑片出現(xiàn)的時間及發(fā)生率
1、2組在白色斑片出現(xiàn)的時間及發(fā)生率上無明顯差異，均在實驗第3周開始出現(xiàn)，至第6周時分別達95%和100%.
二、腫瘤出現(xiàn)的時間及發(fā)生率
1. 1、2組動物的比較：2組于實驗第6周初開始長出腫瘤，而1組于實驗第7周末才出現(xiàn)腫瘤，1組比2組腫瘤出現(xiàn)時間晚12d.第8周時，1組動物僅3個實驗部位出現(xiàn)腫瘤，占4.3%;而2組有17.1%的實驗部位長出腫瘤，兩組間差異有高度顯著性(P<0.01)。12周時，1組的腫瘤發(fā)生率為46.7%，而2組則達100%，二者差異仍有高度顯著性(P<0.01)。
2. 1組正交設(shè)計的統(tǒng)計分析：為了挑選抑制腫瘤發(fā)生的佳配方，我們采用直觀法對實驗12周時各組的非瘤發(fā)生率進行了統(tǒng)計分析(表1)。結(jié)果表明，在A(黃芪)、B(絞股藍)、C(川芎)、D(含硒綠茶)4個主因素中，B、D的絕對值大且相同，說明B、D的即期作用大。從藥物的兩個濃度水平的作用來分析，B2>B1，D1>D2.從交互效應(yīng)分析，雖然A藥和C藥不如B大，但A×C的交互效應(yīng)卻很大，D值為-33(以絕對值計)。交互效應(yīng)的分析表明，A1C1和A2C2的交互效應(yīng)強(y值都是66.25)。由此得出抑制腫瘤發(fā)生或阻止腫瘤發(fā)生的佳配方應(yīng)是A1B2C1D1或A2B2C2D1。
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三、活檢結(jié)果分析
1. 1、2組不典型增生的比較：實驗第4周1、2組均檢出有不典型增生，2組(38.5%)高于1組(16.7%)，但無統(tǒng)計學意義。6周時2組不典型增生檢出率為58.3%，而第1組僅為16.7%，二者差異有顯著性(P<0.05)。8周時2組的不典型增生為74.3%，1組為48.6%，差異仍有顯著性(P<0.05)。如果將癌和不典型增生均計為不良增生，則2組的不良增生率為88.6%，1組為54.2%，二者差異有高度顯著性(P<0.01)。實驗12周的全部活檢結(jié)果表明，2組的癌變率為66.7%，而1組為35.0%，二者差異有高度顯著性(P<0.01)。
2. 1組實驗12周時的正交設(shè)計分析：為了篩選阻止癌發(fā)生的佳配方，我們對12周時的非癌發(fā)生率進行了正交分析(表2)，結(jié)果表明，A、B、C、D4個主因素中，以B的主效應(yīng)作用大(D值大)，且B2的作用大于B1.A、C兩因素的單獨效應(yīng)不及B，但A×C的交互效應(yīng)大(D值的絕對值大)，并以A2×C2的交互效應(yīng)為佳。D在分析中不作為主效應(yīng)，但從兩個水平比較看，D1作用較大，故阻止癌變或抑制癌發(fā)生的佳配方應(yīng)是A2B2C2D1，這與前文抑瘤分析的結(jié)果相似。
討論
目前對口腔癌前疾病的治療尚缺乏有效的藥物，對癌前損害癌變的阻斷研究是近年來的熱點課題，其中尤以對中草藥防癌、阻癌的研究居多[2]。本組結(jié)果表明，肉眼觀，用1023合劑的1組動物腫瘤發(fā)生的時間推遲了12天，實驗8周和12周腫瘤的發(fā)生率顯著低于2組(P<0.01)。病理結(jié)果同樣證實，8周時不典型增生率1組明顯低于2組(P<0.05)，12周時癌的發(fā)生率1組顯著低于2組(P<0.01)。
這些結(jié)果均提示，1023合劑可以抑制腫瘤的發(fā)生，降低異常增生(癌前病變)和癌的發(fā)生率，具有防癌、阻癌的作用。
為了篩選理想的配方，我們對4種藥物各按2種濃度水平進行了正交設(shè)計實驗，以期發(fā)現(xiàn)主效應(yīng)藥物和交互效應(yīng)作用。通過綜合分析后證實，A1B2C1D1和A2B2C2D1為佳配伍，其抑瘤效果佳。對阻止癌變發(fā)生的非癌發(fā)生率的正交設(shè)計分析表明，阻癌的佳配方是A2B2C2D1，與抑瘤生成的佳配方之一相同。此結(jié)果提示：①B起主效應(yīng)作用，A×C配伍增效顯著，D亦有重要作用。②抑瘤和阻癌的佳配方相同，說明其作用機理相似。
我們選擇4種中草藥組成1023合劑，符合中醫(yī)配伍原則和藥物配伍增效互補機理，按現(xiàn)代醫(yī)學理論研究結(jié)果，該合劑中的黃芪[3]、絞股藍[4]二藥有增強免疫系統(tǒng)綜合功能的作用，而且黃芪具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用。提示該藥的抑瘤、防癌效果可能是通過增強和穩(wěn)定機體的免疫功能而實現(xiàn)的。絞股藍具有抗腫瘤和促使癌細胞逆轉(zhuǎn)到正常的作用。從正交設(shè)計分析中看，在抑瘤和阻癌中絞股藍都是主效應(yīng)藥物，此實驗進一步說明絞股藍對阻止癌變有重要作用。川芎能活血、理血、改善血液循環(huán)，使藥物能更有效地發(fā)揮作用。與具有補氣的黃芪合用，還可起到活氣活血的作用，且二者的交互效應(yīng)強，說明二者一起應(yīng)用具有增強作用。綠茶有抗突變作用[5]，硒有抑瘤作用[6]，用含硒綠茶則兩種作用兼?zhèn)洌狙芯勘砻骶G茶亦是主效應(yīng)藥物，能起到抑瘤作用。因此，此合劑無論是在傳統(tǒng)的中醫(yī)理論上，還是在現(xiàn)代醫(yī)學理論上都是較為合理的配方，且對動物無任何毒副作用，藥源豐富，是一種很有研究潛力的防癌、阻癌或健身防癌的保健新藥。
參考文獻
1.靖士俠，郝俊芳，潘洪城，等?？拱┲兴幖疤烊凰幬镉行С煞盅芯窟M展。中國醫(yī)藥學雜志，1991，26：72-76.
2.解京豐，章魁華，秦錦霞，等。實驗性口腔粘膜癌前病變阻斷后的*鼠移植。中華口腔醫(yī)學雜志，1989，24：273-275.
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4.鐘余才。絞股藍藥用研究進展。廣西中醫(yī)藥，1991，14：138-139.
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6.顏學先，王鼎年。硒與腫瘤Ⅲ、植瘤小鼠給抑瘤劑量硒后胞漿中75Se的分布與含硒量蛋白變化。重慶醫(yī)科大學學報，1989，14：85-89.