溶菌酶是廣泛存在于動(dòng)、植物及有機(jī)物體內(nèi)的可作為殺菌劑的蛋白酶，它能夠催化水解肽聚糖上的N—乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之間的糖苷鍵，導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞壁的裂解。尤其對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌作用明顯。我們已確定了柞蠶溶菌酶的cDNA和氨基酸序列。本項(xiàng)研究的目的是分析重組的柞蠶溶菌酶基因?qū)谇蛔冃捂溓蚓淖饔谩?BR> 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)用于柞蠶溶菌酶的表達(dá)及純化。瓊脂擴(kuò)散法用于檢測(cè)重組柞蠶溶菌酶對(duì)口腔變形鏈球菌的抗菌活性。
在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的柞蠶溶菌酶能夠分泌到胞外，并且被糖基化。抑菌圈結(jié)果顯示重組柞蠶溶菌酶對(duì)變形鏈球菌有抑菌活性。
1.本研究建立了柞蠶溶菌酶的畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)。首次使用了柞蠶溶菌酶自身的信號(hào)肽序列，在畢赤酵母細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了柞蠶溶菌酶的分泌表達(dá)。蛋白質(zhì)N端序列分析結(jié)果證實(shí)所表達(dá)的重組柞蠶溶菌酶N端氨基酸序列與預(yù)測(cè)的成熟柞蠶溶菌酶一致，表明柞蠶溶菌酶自身信號(hào)肽能夠準(zhǔn)確有效地將成熟柞蠶溶菌酶分泌到酵母細(xì)胞外。
2.柞蠶溶菌酶在酵母菌中的表達(dá)是在0.5%甲醇誘導(dǎo)下，96小時(shí)達(dá)到高峰;純化的重組柞蠶溶菌酶分子量約為20，000道爾頓;EndoH酶解純化的重組柞蠶溶菌酶證實(shí)，柞蠶溶菌酶在酵母細(xì)胞翻譯過(guò)程中有N—糖基化修飾發(fā)生。
3.本研究采用瓊脂擴(kuò)散法初步分析了重組柞蠶溶菌酶對(duì)變形鏈球菌的作用，重組的柞蠶溶菌酶對(duì)變形鏈球菌具有抑制其生長(zhǎng)的作用。
在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的柞蠶溶菌酶能夠分泌到胞外，并且被糖基化。抑菌圈結(jié)果顯示重組柞蠶溶菌酶對(duì)變形鏈球菌有抑菌活性。
1.本研究建立了柞蠶溶菌酶的畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)。首次使用了柞蠶溶菌酶自身的信號(hào)肽序列，在畢赤酵母細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了柞蠶溶菌酶的分泌表達(dá)。蛋白質(zhì)N端序列分析結(jié)果證實(shí)所表達(dá)的重組柞蠶溶菌酶N端氨基酸序列與預(yù)測(cè)的成熟柞蠶溶菌酶一致，表明柞蠶溶菌酶自身信號(hào)肽能夠準(zhǔn)確有效地將成熟柞蠶溶菌酶分泌到酵母細(xì)胞外。
2.柞蠶溶菌酶在酵母菌中的表達(dá)是在0.5%甲醇誘導(dǎo)下，96小時(shí)達(dá)到高峰;純化的重組柞蠶溶菌酶分子量約為20，000道爾頓;EndoH酶解純化的重組柞蠶溶菌酶證實(shí)，柞蠶溶菌酶在酵母細(xì)胞翻譯過(guò)程中有N—糖基化修飾發(fā)生。
3.本研究采用瓊脂擴(kuò)散法初步分析了重組柞蠶溶菌酶對(duì)變形鏈球菌的作用，重組的柞蠶溶菌酶對(duì)變形鏈球菌具有抑制其生長(zhǎng)的作用。