過(guò)氧化物酶體的發(fā)現(xiàn)及所含酶類-細(xì)胞生物學(xué)

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過(guò)氧化物酶體(peroxisome)
    1954年,在電子顯微鏡下檢查腎小管時(shí)發(fā)現(xiàn)一種膜結(jié)合的顆粒,直徑約為0.5~1.0μm.由于不知道這種顆粒的功能,將它稱為微體(microbody)。微體有兩種主要類型∶過(guò)氧化物酶體和乙醛酸循環(huán)體(glyoxysomes),后者只在植物中發(fā)現(xiàn)。
    圖示鼠肝細(xì)胞的過(guò)氧化物酶體的電子顯微鏡照片,每一個(gè)微體中有一個(gè)晶核,動(dòng)物細(xì)胞微體中的晶核幾乎都是尿酸氧化酶。
    過(guò)氧化物酶體的發(fā)現(xiàn)及所含酶類
    ■ 過(guò)氧化物酶體的發(fā)現(xiàn)
    過(guò)氧化物酶體、溶酶體都是de Duve 和他的同事發(fā)現(xiàn)的,發(fā)現(xiàn)的過(guò)程很簡(jiǎn)單,但是實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)卻給我們以極大的啟發(fā)。
    ● 離心分離實(shí)驗(yàn)
    de Duve和他的同事通過(guò)梯度離心分離到溶酶體之后發(fā)現(xiàn)至少有一種酶與溶酶體酶的性質(zhì)不同: 尿酸氧化酶不是酸性水解酶,但離心時(shí)總是與酸性水解酶在一起, 只是沉降行為稍有不同。
    通過(guò)蔗糖密度梯度離心,發(fā)現(xiàn)尿酸氧化酶存在的密度區(qū)是1.25g/cm3,而線粒體和溶酶體分別是1.19g/cm3和1.20g/cm3~1.24g/cm3,由于密度差異太小,而溶酶體自身的密度范圍又很寬,如何將尿酸氧化酶與溶酶體的酶分開(kāi)?
    他們根據(jù)一次偶然的實(shí)驗(yàn)觀察,設(shè)計(jì)了一個(gè)很好的方法:用一種去垢劑Triton WR1339注射小鼠,這種去垢劑在細(xì)胞內(nèi)主要積累在溶酶體中,并使溶酶體的浮力密度降低到1.1-1.14g/cm3,這樣就可以將尿酸氧化酶與溶酶體和線粒體分開(kāi)。