以六六六(BHC)、滴滴涕(DDT)為代表的有機氯農(nóng)藥是我國最早大規(guī)模使用的農(nóng)藥，因其有累積性、不易降解，我國在1983年已禁止使用，但目前在許多藥材中仍可檢出，直接影響了中藥的出口。菊花是一味常用中藥，本文收集了從4月至11月不同生長期菊花的栽培品，采用氣相色譜法分析其有機氯農(nóng)藥殘留量，并探討了累積規(guī)律，為降低有機氯農(nóng)藥殘留尋找途徑。
1 實驗材料
1.1 儀器裝置 HP4890D氣相色譜儀(63Ni電子捕獲檢測器)，KQ-500型超聲波清洗器，ZFQ-85A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，K-D濃縮器及其他必備實驗裝置及器皿。
1.2 試劑 農(nóng)藥標準品：α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC，PP'-DDE，PP'-DDD，OP'-DDT，PP'-DDT(購自美國 Chemservice Co., 純度>99.9%); 丙酮、二氯甲烷、正己烷均為色譜純(美國Tedia Company)；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。
2 實驗方法
2.1 色譜條件 HP-5彈性石英毛細管柱(30m×0.53mm×2.65μm)；進樣口溫度230℃；檢測器溫度28℃；柱升溫程序：初始180℃，7℃·min-1升到230℃，保持 10min，5℃·min-1升到250℃，保持20min；衰減0；量程3；進樣量1μl；外標法定量。
2.2 標準曲線的繪制 分別精密稱取α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC和 PP'-DDE， PP'-DDD， OP'-DDT，PP'-DDT各10.0mg于10ml容量瓶中，用正已烷稀釋到10ml，制成標準貯備液。將此標準貯備液分別稀釋100倍，取此中間液配成每1ml含a-BHC 0.1μg，β-BHC 0.5μg, γ-BHC 0.1μg， δ-BHC 0.2μg， PP'-DDE0.5μg，PP'-DDD1.5μg， OP'DDT1.0μg， PP'-DDT1.5μg的混合標準溶液，用正己烷稀釋至一系列濃度，各取1μL進樣，依2.1色譜條件計算回歸方程。并將各標準貯備液稀釋成不同濃度，以5倍噪聲作為方法測定最低檢出量，以2g樣品取樣計算最低檢出濃度。
2.3 樣品的制備和測定
菊花樣品采自江蘇鹽城某藥材種植場，經(jīng)本校王永珍教授定為菊花Chrysanthemum morifolium Ramat。在生長期從4月～11月用多點采樣法每月在不同點各采集植株1次。采得后分別取根、葉、花，于60℃干燥4h，粉碎。精密稱取樣品2.0g，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml，稱重，超聲處理30min， 放冷，用丙酮補足重量損失。加氯化鈉約6g，并精密加二氯甲烷30ml， 超聲處理15min， 用二氯甲烷補足重量損失, 靜置分層。將有機相轉(zhuǎn)入裝有約4g無水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中， 放置4h。精密量取35ml， 于40℃水浴減壓濃縮至近干，加正己烷約10ml，充分振蕩，再于40℃水浴減壓濃縮至近干，如此重復(fù)l一2次，使二氯甲烷及丙酮除盡。用正已烷溶解并轉(zhuǎn)移至10mL具塞刻度離心管中, 精密加正己烷到5ml。小心加入濃硫酸lmL，振搖1min，離心10min(3000 r·min-1)。用移液管精密移取上清液2ml置K-D瓶中，40℃下將溶液濃縮至適量，再稀釋至1ml， 取1μl進樣。每份樣品重復(fù)2次。
3 結(jié)果
3.1 精密度試驗
3.1.1 儀器精密度 精密吸取稀釋的標準品溶液1vl， 重復(fù)進樣5次，計算各農(nóng)藥的RSD值。
3.1.2 方法精密度 準確稱取8月份采集的菊花葉樣品5份，按2.3項下制備樣品，按2.1條件測定, 計算各農(nóng)藥的RSD值。
3.2 加樣回收率試驗
稱取8月份采集的菊花葉樣品6份，加入2個添加水平的混合標準品溶液，按2.3項下操作測定，所得結(jié)果扣除8月份菊花葉樣品中各農(nóng)藥平均殘留量，計算回收率。根據(jù)有關(guān)規(guī)定，農(nóng)藥殘留檢測方法的回收率大于80%即可，當農(nóng)藥殘留量在10-100ng/g-1時，允許的RSD為±50%，故本實驗的準確度符合要求。
3.3 樣品檢測結(jié)果
4 討論
4.1 《中國藥典》規(guī)定，菊花在9～11月花盛開時采收，本產(chǎn)區(qū)花11月盛開，故選擇11月取樣。實驗研究表明，4月～11月，菊花根、葉中有機氯農(nóng)藥殘留量呈逐月增高趨勢，說明菊花中有機氯農(nóng)藥污染的途徑多與從土壤中吸收、蓄積有關(guān)。不同器官殘留量為葉略大于花，遠大于根，這可能由于有機氯農(nóng)藥多為脂溶性成分，而菊花葉、花中含大量揮發(fā)油，易蓄積造成。
4.2 4月份采集的菊花根、葉中已有相當量的BHC，DDT, 以后每月殘留量增長幅度遠小于此。這是因為產(chǎn)地菊花多用分根繁殖，老根已有一定量的農(nóng)藥殘留。因此，選擇無污染的種苗是降低有機氯農(nóng)藥殘留的關(guān)鍵。
4.3 《中國藥典》2000年版對甘草、黃芪的總BHC，總DDT提出了限量要求，均不得過千萬分之二(200ng/g-1)，參照此標準，本實驗所測農(nóng)藥殘留均符合《中國藥典》要求。
1 實驗材料
1.1 儀器裝置 HP4890D氣相色譜儀(63Ni電子捕獲檢測器)，KQ-500型超聲波清洗器，ZFQ-85A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，K-D濃縮器及其他必備實驗裝置及器皿。
1.2 試劑 農(nóng)藥標準品：α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC，PP'-DDE，PP'-DDD，OP'-DDT，PP'-DDT(購自美國 Chemservice Co., 純度>99.9%); 丙酮、二氯甲烷、正己烷均為色譜純(美國Tedia Company)；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。
2 實驗方法
2.1 色譜條件 HP-5彈性石英毛細管柱(30m×0.53mm×2.65μm)；進樣口溫度230℃；檢測器溫度28℃；柱升溫程序：初始180℃，7℃·min-1升到230℃，保持 10min，5℃·min-1升到250℃，保持20min；衰減0；量程3；進樣量1μl；外標法定量。
2.2 標準曲線的繪制 分別精密稱取α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC和 PP'-DDE， PP'-DDD， OP'-DDT，PP'-DDT各10.0mg于10ml容量瓶中，用正已烷稀釋到10ml，制成標準貯備液。將此標準貯備液分別稀釋100倍，取此中間液配成每1ml含a-BHC 0.1μg，β-BHC 0.5μg, γ-BHC 0.1μg， δ-BHC 0.2μg， PP'-DDE0.5μg，PP'-DDD1.5μg， OP'DDT1.0μg， PP'-DDT1.5μg的混合標準溶液，用正己烷稀釋至一系列濃度，各取1μL進樣，依2.1色譜條件計算回歸方程。并將各標準貯備液稀釋成不同濃度，以5倍噪聲作為方法測定最低檢出量，以2g樣品取樣計算最低檢出濃度。
2.3 樣品的制備和測定
菊花樣品采自江蘇鹽城某藥材種植場，經(jīng)本校王永珍教授定為菊花Chrysanthemum morifolium Ramat。在生長期從4月～11月用多點采樣法每月在不同點各采集植株1次。采得后分別取根、葉、花，于60℃干燥4h，粉碎。精密稱取樣品2.0g，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml，稱重，超聲處理30min， 放冷，用丙酮補足重量損失。加氯化鈉約6g，并精密加二氯甲烷30ml， 超聲處理15min， 用二氯甲烷補足重量損失, 靜置分層。將有機相轉(zhuǎn)入裝有約4g無水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中， 放置4h。精密量取35ml， 于40℃水浴減壓濃縮至近干，加正己烷約10ml，充分振蕩，再于40℃水浴減壓濃縮至近干，如此重復(fù)l一2次，使二氯甲烷及丙酮除盡。用正已烷溶解并轉(zhuǎn)移至10mL具塞刻度離心管中, 精密加正己烷到5ml。小心加入濃硫酸lmL，振搖1min，離心10min(3000 r·min-1)。用移液管精密移取上清液2ml置K-D瓶中，40℃下將溶液濃縮至適量，再稀釋至1ml， 取1μl進樣。每份樣品重復(fù)2次。
3 結(jié)果
3.1 精密度試驗
3.1.1 儀器精密度 精密吸取稀釋的標準品溶液1vl， 重復(fù)進樣5次，計算各農(nóng)藥的RSD值。
3.1.2 方法精密度 準確稱取8月份采集的菊花葉樣品5份，按2.3項下制備樣品，按2.1條件測定, 計算各農(nóng)藥的RSD值。
3.2 加樣回收率試驗
稱取8月份采集的菊花葉樣品6份，加入2個添加水平的混合標準品溶液，按2.3項下操作測定，所得結(jié)果扣除8月份菊花葉樣品中各農(nóng)藥平均殘留量，計算回收率。根據(jù)有關(guān)規(guī)定，農(nóng)藥殘留檢測方法的回收率大于80%即可，當農(nóng)藥殘留量在10-100ng/g-1時，允許的RSD為±50%，故本實驗的準確度符合要求。
3.3 樣品檢測結(jié)果
4 討論
4.1 《中國藥典》規(guī)定，菊花在9～11月花盛開時采收，本產(chǎn)區(qū)花11月盛開，故選擇11月取樣。實驗研究表明，4月～11月，菊花根、葉中有機氯農(nóng)藥殘留量呈逐月增高趨勢，說明菊花中有機氯農(nóng)藥污染的途徑多與從土壤中吸收、蓄積有關(guān)。不同器官殘留量為葉略大于花，遠大于根，這可能由于有機氯農(nóng)藥多為脂溶性成分，而菊花葉、花中含大量揮發(fā)油，易蓄積造成。
4.2 4月份采集的菊花根、葉中已有相當量的BHC，DDT, 以后每月殘留量增長幅度遠小于此。這是因為產(chǎn)地菊花多用分根繁殖，老根已有一定量的農(nóng)藥殘留。因此，選擇無污染的種苗是降低有機氯農(nóng)藥殘留的關(guān)鍵。
4.3 《中國藥典》2000年版對甘草、黃芪的總BHC，總DDT提出了限量要求，均不得過千萬分之二(200ng/g-1)，參照此標準，本實驗所測農(nóng)藥殘留均符合《中國藥典》要求。