本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用，采用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計(jì)，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)的一種方法。 標(biāo)準(zhǔn)品的品種、分子式及理論計(jì)算值見表2.培養(yǎng)基及其制備方法培養(yǎng)基I胨5g瓊脂15～20g牛肉浸出粉3g水1000ml磷酸氫二鉀3g除瓊脂外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.8～8.0或6.5～6.6，在115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基Ⅱ胨6g葡萄糖1g牛肉浸出粉1.5g瓊脂15～20g酵母浸出粉6g水1000ml除瓊脂和葡萄糖外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，加葡萄糖溶解后，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.8～8.0或6.5～6.6，在115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基Ⅲ胨5g磷酸氫二鉀3.68g牛肉浸出粉1.5g磷酸二氫鉀1.32g酵母浸出粉3g葡萄糖1g氯化鈉3.5g水1000ml除葡萄糖外，混合上述成分，加熱溶化后濾過(guò)，加葡萄糖溶解后，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.0～7.2，在115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基Ⅳ胨10g葡萄糖10g氯化鈉10g瓊脂20～30g枸櫞酸鈉10g水1000ml除瓊脂和葡萄糖外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，在109℃加熱15分鐘，于70℃以上保溫靜置1小時(shí)后濾過(guò)，加葡萄糖溶解后，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為6.0～6.2，在115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基Ⅴ胨10g瓊脂15～20g麥芽糖40g水1000ml除瓊脂和麥芽糖外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，加麥芽糖溶解后，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2～7.4，按需要分裝，在115℃滅菌30分鐘，趁熱斜放使凝固成斜面。
培養(yǎng)基Ⅵ胨8g磷酸二氫鉀1g 牛肉浸出粉3g 葡萄糖2.5g酵母浸出粉5g瓊脂15～20g氯化鈉45g水1000ml 磷酸氫二鉀 3.3g 除瓊脂和葡萄糖外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，加葡萄糖溶解后，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2～7.4，在115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基Ⅶ胨5g枸櫞酸鈉10g牛肉浸出粉3g瓊脂15～20g磷酸氫二鉀7g水1000ml磷酸二氫鉀3g除瓊脂外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為6.5～6.6，在115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基Ⅷ酵母浸出粉1g瓊脂15～20g硫酸銨1g磷酸鹽緩沖液（pH6.0）1000ml葡萄糖5g混合上述成分，加熱溶化后濾過(guò)，在115℃滅菌30分鐘。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基胨10g瓊脂15～20g氯化鈉5g肉浸液1000ml除瓊脂外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2～7.4，分裝，在115℃滅菌30分鐘，趁熱斜放使凝固成斜面。培養(yǎng)基可以采用相同成分的干燥培養(yǎng)基代替，臨用時(shí)，照使用說(shuō)明配制和滅菌，備用。滅菌緩沖液磷酸鹽緩沖液（pH6.0）取磷酸氫二鉀2g與磷酸二氫鉀8g，加水使成1000ml，濾過(guò)，在115℃滅菌30分鐘。
磷酸鹽緩沖液（pH7.8）取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使成1000ml，濾過(guò)，在115℃滅菌30分鐘。
磷酸鹽緩沖液（pH10.5）取磷酸氫二鉀35g，加10mol/L氫氧化鉀溶液2ml，加水使成1000ml，濾過(guò)，在115℃滅菌30分鐘。菌懸液的制備枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）懸液取枯草芽孢桿菌［CMCC（B）63501］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于盛有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，在35～37℃培養(yǎng)7日，用革蘭氏染色法涂片鏡檢，應(yīng)有芽孢85％以上。用滅菌水將芽孢洗下，在65℃加熱30分鐘，備用。短小芽孢桿菌（Bacilluspumilus）懸液 取短小芽孢桿菌［CMCC（B）63202］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，照上述方法制備。金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）懸液取金黃色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，在35～37℃培養(yǎng)20～22小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水或0.9％滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。
藤黃微球菌（Micrococcusluteus）懸液取藤黃微球菌［CMCC（B）28001］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于盛有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，在26～27℃培養(yǎng)24小時(shí)，或采用適當(dāng)方法制備的菌斜面，用培養(yǎng)基Ⅲ或0.9％滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。大腸桿菌（Escherichiacoli）懸液取大腸桿菌［CMCC（B）44103］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，在35～37℃培養(yǎng)20～22小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，備用。啤酒酵母菌（Saccharomycescerevisiae）懸液取啤酒酵母菌（9763）的V號(hào)培養(yǎng)基瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于Ⅳ號(hào)培養(yǎng)基瓊脂斜面上。在32～35℃培養(yǎng)24小時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下置含有滅菌玻璃珠的試管中，振搖均勻，備用。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備標(biāo)準(zhǔn)品的使用和保存，應(yīng)照標(biāo)準(zhǔn)品說(shuō)明書的規(guī)定。臨用時(shí)照表1的規(guī)定進(jìn)行稀釋。供試品溶液的制備精密稱（或量）取供試品適量，用各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑溶解后，再按估計(jì)效價(jià)或標(biāo)示量照表1的規(guī)定稀釋至與標(biāo)準(zhǔn)品相當(dāng)?shù)臐舛取ｋp碟的制備取直徑約90mm、高16～17mm的平底雙碟，分別注入加熱融化的培養(yǎng)基（照表1）20ml，使在碟底內(nèi)均勻攤布，放置水平臺(tái)上使凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基適量加熱融化后，放冷至48～50℃（芽孢可至60℃），加入規(guī)定的試驗(yàn)菌懸液適量（能得清晰的抑菌圈為度。二劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18～22mm，三劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的中心濃度所致的抑菌圈直徑在15～18mm），搖勻，在每1雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層。放置水平臺(tái)上冷卻后，在每1雙碟中以等距離均勻安置不銹鋼小管（內(nèi)徑6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，外徑7.8±0.1mm）4個(gè)（二劑量法）或6個(gè)（三劑量法），用陶瓦圓蓋覆蓋備用。
檢定法二劑量法取照上述方法制備的雙碟不得少于4個(gè)，在每1雙碟中對(duì)角的2個(gè)不銹鋼小管中分別滴裝高濃度及低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余2個(gè)小管中分別滴裝相應(yīng)的高低兩種濃度的供試品溶液；高、低濃度的劑距為2：1或4：1.在規(guī)定條件下培養(yǎng)后，測(cè)量各個(gè)抑菌圈的直徑（或面積），照生物檢定統(tǒng)計(jì)法（附錄ⅩⅣ）中的（2.2）法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)及效價(jià)計(jì)算。三劑量法取照上述方法制備的雙碟不得少于6個(gè)，在每1雙碟中間隔的3個(gè)不銹鋼小管中分別滴裝高濃度（S<[3]>）、中濃度（S<[2]>）及低濃度（S<[1]>）的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余3個(gè)小管分別滴裝相應(yīng)的高、中、低三種濃度的供試品溶液；三種濃度的劑距為1∶0.8.在規(guī)定條件下培養(yǎng)后，測(cè)量各個(gè)抑菌圈的直徑（或面積），照生物檢定統(tǒng)計(jì)法（附錄ⅩⅣ）中的（3.3）法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)及效價(jià)計(jì)算。
本法計(jì)算所得效價(jià)，如低于估計(jì)效價(jià)的90％或高于估計(jì)效價(jià)的110％時(shí)，則應(yīng)調(diào)整其估計(jì)效價(jià)，予以重試。
除另有規(guī)定外，本法的可信限率不得大于5％。
培養(yǎng)基Ⅵ胨8g磷酸二氫鉀1g 牛肉浸出粉3g 葡萄糖2.5g酵母浸出粉5g瓊脂15～20g氯化鈉45g水1000ml 磷酸氫二鉀 3.3g 除瓊脂和葡萄糖外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，加葡萄糖溶解后，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2～7.4，在115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基Ⅶ胨5g枸櫞酸鈉10g牛肉浸出粉3g瓊脂15～20g磷酸氫二鉀7g水1000ml磷酸二氫鉀3g除瓊脂外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為6.5～6.6，在115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基Ⅷ酵母浸出粉1g瓊脂15～20g硫酸銨1g磷酸鹽緩沖液（pH6.0）1000ml葡萄糖5g混合上述成分，加熱溶化后濾過(guò)，在115℃滅菌30分鐘。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基胨10g瓊脂15～20g氯化鈉5g肉浸液1000ml除瓊脂外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH使比最終的pH值略高0.2～0.4，加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2～7.4，分裝，在115℃滅菌30分鐘，趁熱斜放使凝固成斜面。培養(yǎng)基可以采用相同成分的干燥培養(yǎng)基代替，臨用時(shí)，照使用說(shuō)明配制和滅菌，備用。滅菌緩沖液磷酸鹽緩沖液（pH6.0）取磷酸氫二鉀2g與磷酸二氫鉀8g，加水使成1000ml，濾過(guò)，在115℃滅菌30分鐘。
磷酸鹽緩沖液（pH7.8）取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使成1000ml，濾過(guò)，在115℃滅菌30分鐘。
磷酸鹽緩沖液（pH10.5）取磷酸氫二鉀35g，加10mol/L氫氧化鉀溶液2ml，加水使成1000ml，濾過(guò)，在115℃滅菌30分鐘。菌懸液的制備枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）懸液取枯草芽孢桿菌［CMCC（B）63501］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于盛有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，在35～37℃培養(yǎng)7日，用革蘭氏染色法涂片鏡檢，應(yīng)有芽孢85％以上。用滅菌水將芽孢洗下，在65℃加熱30分鐘，備用。短小芽孢桿菌（Bacilluspumilus）懸液 取短小芽孢桿菌［CMCC（B）63202］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，照上述方法制備。金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）懸液取金黃色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，在35～37℃培養(yǎng)20～22小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水或0.9％滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。
藤黃微球菌（Micrococcusluteus）懸液取藤黃微球菌［CMCC（B）28001］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于盛有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，在26～27℃培養(yǎng)24小時(shí)，或采用適當(dāng)方法制備的菌斜面，用培養(yǎng)基Ⅲ或0.9％滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。大腸桿菌（Escherichiacoli）懸液取大腸桿菌［CMCC（B）44103］的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，在35～37℃培養(yǎng)20～22小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，備用。啤酒酵母菌（Saccharomycescerevisiae）懸液取啤酒酵母菌（9763）的V號(hào)培養(yǎng)基瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于Ⅳ號(hào)培養(yǎng)基瓊脂斜面上。在32～35℃培養(yǎng)24小時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下置含有滅菌玻璃珠的試管中，振搖均勻，備用。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備標(biāo)準(zhǔn)品的使用和保存，應(yīng)照標(biāo)準(zhǔn)品說(shuō)明書的規(guī)定。臨用時(shí)照表1的規(guī)定進(jìn)行稀釋。供試品溶液的制備精密稱（或量）取供試品適量，用各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑溶解后，再按估計(jì)效價(jià)或標(biāo)示量照表1的規(guī)定稀釋至與標(biāo)準(zhǔn)品相當(dāng)?shù)臐舛取ｋp碟的制備取直徑約90mm、高16～17mm的平底雙碟，分別注入加熱融化的培養(yǎng)基（照表1）20ml，使在碟底內(nèi)均勻攤布，放置水平臺(tái)上使凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基適量加熱融化后，放冷至48～50℃（芽孢可至60℃），加入規(guī)定的試驗(yàn)菌懸液適量（能得清晰的抑菌圈為度。二劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18～22mm，三劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的中心濃度所致的抑菌圈直徑在15～18mm），搖勻，在每1雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層。放置水平臺(tái)上冷卻后，在每1雙碟中以等距離均勻安置不銹鋼小管（內(nèi)徑6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，外徑7.8±0.1mm）4個(gè)（二劑量法）或6個(gè)（三劑量法），用陶瓦圓蓋覆蓋備用。
檢定法二劑量法取照上述方法制備的雙碟不得少于4個(gè)，在每1雙碟中對(duì)角的2個(gè)不銹鋼小管中分別滴裝高濃度及低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余2個(gè)小管中分別滴裝相應(yīng)的高低兩種濃度的供試品溶液；高、低濃度的劑距為2：1或4：1.在規(guī)定條件下培養(yǎng)后，測(cè)量各個(gè)抑菌圈的直徑（或面積），照生物檢定統(tǒng)計(jì)法（附錄ⅩⅣ）中的（2.2）法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)及效價(jià)計(jì)算。三劑量法取照上述方法制備的雙碟不得少于6個(gè)，在每1雙碟中間隔的3個(gè)不銹鋼小管中分別滴裝高濃度（S<[3]>）、中濃度（S<[2]>）及低濃度（S<[1]>）的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余3個(gè)小管分別滴裝相應(yīng)的高、中、低三種濃度的供試品溶液；三種濃度的劑距為1∶0.8.在規(guī)定條件下培養(yǎng)后，測(cè)量各個(gè)抑菌圈的直徑（或面積），照生物檢定統(tǒng)計(jì)法（附錄ⅩⅣ）中的（3.3）法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)及效價(jià)計(jì)算。
本法計(jì)算所得效價(jià)，如低于估計(jì)效價(jià)的90％或高于估計(jì)效價(jià)的110％時(shí)，則應(yīng)調(diào)整其估計(jì)效價(jià)，予以重試。
除另有規(guī)定外，本法的可信限率不得大于5％。