體內(nèi)藥物分析——樣品的種類、采集和儲(chǔ)存

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一、樣品的種類和選取原則:
    (一)血樣:血漿(plasma)和血清(serum)是體內(nèi)藥物分析最常采用的樣本,其中選用最多的是血漿。因血漿中的藥濃可反映藥物在體內(nèi)(靶器管)的狀況。而且血漿中藥物濃度的數(shù)據(jù)報(bào)道較多,可供借鑒。血漿是全血(whole blood)在加肝素、枸櫞酸、草酸鹽等抗凝劑的全血經(jīng)離心后分取,量約為全血的一半。血清則是在血液中纖維蛋白元等影響下,引起析出血塊,離心取得。血塊凝結(jié)時(shí)往往易造成藥物吸附損失。全血也應(yīng)加入抗凝劑混勻,以防凝血。對(duì)大多數(shù)藥物來說血漿濃度與紅細(xì)胞中的濃度成正比,所以測定全血也不能提供更多的數(shù)據(jù),而全血的凈化較血漿與血清麻煩,尤其是溶血后,血色素等可能會(huì)給測定帶來影響。但是一些可與紅血球結(jié)合或藥物在血漿和血球的分配比率因不同病人而異的情況下,則宜采用全血。血樣采取量會(huì)受到一定的限制,血樣取樣時(shí)間間隔問題也常隨測定目的不同而異。目前大都是測定原型藥物總量。當(dāng)藥物與血清蛋白結(jié)合率穩(wěn)定時(shí),血藥總濃度可以有效表示游離藥物的濃度。但對(duì)低蛋白癥或尿毒癥患者,藥物結(jié)合率降低,則在通常安全有效的血藥總濃度中,游離型藥物濃度可顯著增加。
    (二)尿樣(urine):尿樣測定主要用于藥物劑量回收研究、藥物腎清除率和生物利用度等研究,以及測定代謝物類型等。體內(nèi)藥物清除主要是通過尿液排出,藥物可以原型(母體藥物)或代謝物及其綴合物形式排出。尿液藥物濃度較高,收集量可以很大,但尿液濃度通常變化較大,所以宜測定一定時(shí)間內(nèi)尿中藥物的總量(如8、12、24小時(shí)內(nèi)的累計(jì)量),需記錄排出尿液體積及尿藥濃度。尿藥濃度改變不直接反映血藥濃度,受試者腎功能將影響藥物的排泄。尿中藥物大多呈綴合狀態(tài),測定前要將綴合的藥物游離。此外,采集尿液不可能在較短時(shí)間內(nèi)多次取樣,排尿時(shí)間較難掌握(尤其是嬰兒),同時(shí)也具有不易采集完全的缺點(diǎn) .
    (三)唾液(saliva):唾液中的藥物濃度通常與血漿濃度相關(guān)。樣品易得,取樣無損害,尤易為兒童接收。有些可從藥物唾液濃度推定血漿中游離藥物濃度。但有些蛋白結(jié)合率較高的藥物在唾液中的濃度比血漿濃度低得多,需高靈敏度的方法才能檢測。唾液pH值 6.9±0.5,每日分泌量1~1.5L,含有的主要電解質(zhì)有Na+、K+、Cl-、HCO3 -等,主要有機(jī)成分是粘液質(zhì)和淀粉酶。采樣一般是在漱口后15分鐘,收集口內(nèi)自然流出或經(jīng)舌在口內(nèi)攪動(dòng)后流出的混合唾液(吸管內(nèi)吸附的少量唾液用稀釋液洗出),用2000~3000rpm離心15分鐘,小心吸取上清液,進(jìn)一步分離、凈化。也可采用物理(嚼石蠟片、小塊聚四氟乙烯或玻璃大理石)或化學(xué)(酒石酸、維生素C)的方法刺激,在短時(shí)間內(nèi)可得到大量唾液,但藥濃也可能會(huì)受到影響。
    (四)其它:乳汁、動(dòng)物臟器組織勻漿等。
    二、樣品儲(chǔ)存和穩(wěn)定性考察:
    取樣后立即進(jìn)行分析,冷藏(4℃)、冰凍(-20℃)有時(shí)也不能完全保證樣品不起變化。尿液是很好的細(xì)菌生長液,若需收集24小時(shí)或更長時(shí)間的樣品或不能立即測定的,應(yīng)置冰箱冷藏或加防腐劑(1%甲苯、過飽和氯仿)保存。分析樣品貯存時(shí)應(yīng)考慮:儲(chǔ)存條件;樣品在貯存中會(huì)對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生什么影響;評(píng)述樣品穩(wěn)定性時(shí)會(huì)發(fā)生什么問題;如何預(yù)防或校正不穩(wěn)定樣品的分析結(jié)果。