1. 儀器的校正和檢定 由于溫度變化對機械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動，因此除應(yīng)定期對所用的儀器進行全面校正檢定外，還應(yīng)于測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強譜線237.83nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm，313.16nm，334.15nm，365.02nm，404.66nm，435.83nm，546.07nm與576.96nm，或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正，鈥玻璃在波長279.4nm，287.5nm，333.7nm，360.9nm，418.5nm，460.0nm，484.5nm，536.2nm與637.5nm處有尖銳吸收峰，也可作波長校正用，但因來源不同或隨著時間的推移會有微小的變化，使用時應(yīng)注意。
吸光度的準確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長處測定并計算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較，符合下表的規(guī)定。
波長/nm 235（最?。?257（） 313（最?。?350（）
吸收系數(shù)（E1%1cm） 124.5 144.0 48.62 106.6
標準值及其許可范圍 123.0～126.0 142. 8～146. 2 47.0～50.3 105.5～108.5
雜散光的檢查可按下表所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。
試劑 濃度/%（g/ml） 測定用波長/nm 透光率/%
碘化鈉 1.00 220 ＜0.8
亞硝酸鈉 5.00 340 ＜0.8
2.對溶劑的要求含有雜原子的有機溶劑，通常均具有很強的末端吸收。因此，當作溶劑使用時，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm.另外，當溶劑不純時，也可能增加干擾吸收。因此，在測定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求，即用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質(zhì)）測定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度，在220～240nm范圍內(nèi)不得超過0.40，在241～250nm范圍內(nèi)不得超過0.20，在251～300nm范圍內(nèi)不得超過0.10，在300nm以上時不得超過0.05.
3.測定法測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點的吸光度，或由儀器在規(guī)定波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi)，并以吸光度的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸光度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度的十分之一，否則測得的吸光度會偏低；狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增加為準，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，或由儀器自動扣除空白讀數(shù)后再計算含量。
當溶液的pH值對測定結(jié)果有影響時，應(yīng)將供試品溶液和對照品溶液的pH值調(diào)成一致。
用作鑒別和檢查項目的方法，分別按各品種項下的方法進行。
用于含量測定的方法一般有以下幾種。
（1）對照品比較法按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的100%±10％，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度后，按下式計算供試品中被測溶液的濃度：
CX＝（AX／AR）CR
式中CX為供試品溶液的濃度；
AX為供試品溶液的吸光度；來源：考試大
CR為對照品溶液的濃度；
AR為對照品溶液的吸光度。
（2）吸收系數(shù)法按各品種項下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時，吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100，并注意儀器的校正和檢定。
（3）計算分光光度法計算分光光度法有多種，使用時均應(yīng)按各品種項下規(guī)定的方法進行。當吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響，故對照品和供試品測試條件應(yīng)盡可能一致。計算分光光度法一般不宜用作含量測定。
（4）比色法供試品本身在紫外-可見區(qū)沒有強吸收，但可經(jīng)加入適當?shù)娘@色劑顯色后測定的方法叫比色法。
用比色法測定時，由于顯色時影響顯色深淺的因素較多，應(yīng)取對照品或標準品同時操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。在規(guī)定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸光度后，按上述（1）法計算供試品濃度。
當吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線性時，應(yīng)取數(shù)份梯度量的對照品溶液，用溶劑補充至同一體積，顯色后測定各份溶液的吸光度，然后以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標準曲線，再根據(jù)供試品的吸光度在標準曲線上求出其含量。
吸光度的準確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長處測定并計算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較，符合下表的規(guī)定。
波長/nm 235（最?。?257（） 313（最?。?350（）
吸收系數(shù)（E1%1cm） 124.5 144.0 48.62 106.6
標準值及其許可范圍 123.0～126.0 142. 8～146. 2 47.0～50.3 105.5～108.5
雜散光的檢查可按下表所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。
試劑 濃度/%（g/ml） 測定用波長/nm 透光率/%
碘化鈉 1.00 220 ＜0.8
亞硝酸鈉 5.00 340 ＜0.8
2.對溶劑的要求含有雜原子的有機溶劑，通常均具有很強的末端吸收。因此，當作溶劑使用時，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm.另外，當溶劑不純時，也可能增加干擾吸收。因此，在測定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求，即用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質(zhì)）測定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度，在220～240nm范圍內(nèi)不得超過0.40，在241～250nm范圍內(nèi)不得超過0.20，在251～300nm范圍內(nèi)不得超過0.10，在300nm以上時不得超過0.05.
3.測定法測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點的吸光度，或由儀器在規(guī)定波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi)，并以吸光度的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸光度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度的十分之一，否則測得的吸光度會偏低；狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增加為準，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，或由儀器自動扣除空白讀數(shù)后再計算含量。
當溶液的pH值對測定結(jié)果有影響時，應(yīng)將供試品溶液和對照品溶液的pH值調(diào)成一致。
用作鑒別和檢查項目的方法，分別按各品種項下的方法進行。
用于含量測定的方法一般有以下幾種。
（1）對照品比較法按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的100%±10％，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度后，按下式計算供試品中被測溶液的濃度：
CX＝（AX／AR）CR
式中CX為供試品溶液的濃度；
AX為供試品溶液的吸光度；來源：考試大
CR為對照品溶液的濃度；
AR為對照品溶液的吸光度。
（2）吸收系數(shù)法按各品種項下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時，吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100，并注意儀器的校正和檢定。
（3）計算分光光度法計算分光光度法有多種，使用時均應(yīng)按各品種項下規(guī)定的方法進行。當吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響，故對照品和供試品測試條件應(yīng)盡可能一致。計算分光光度法一般不宜用作含量測定。
（4）比色法供試品本身在紫外-可見區(qū)沒有強吸收，但可經(jīng)加入適當?shù)娘@色劑顯色后測定的方法叫比色法。
用比色法測定時，由于顯色時影響顯色深淺的因素較多，應(yīng)取對照品或標準品同時操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。在規(guī)定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸光度后，按上述（1）法計算供試品濃度。
當吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線性時，應(yīng)取數(shù)份梯度量的對照品溶液，用溶劑補充至同一體積，顯色后測定各份溶液的吸光度，然后以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標準曲線，再根據(jù)供試品的吸光度在標準曲線上求出其含量。