化學(xué)分析之中草藥成分一般鑒別方法

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中草藥主要來源于植物。植物的化學(xué)成分較復(fù)雜,有些成分是植物所共有的,如纖維素、蛋白質(zhì)、油脂、淀粉、糖類、色素等。有些成分僅是某些植物所特有的,如生物堿類、甙類、揮發(fā)油、有機(jī)酸、鞣質(zhì)等。
    各類化學(xué)成分均具有一定的特性,一般可由藥材的外觀、色、嗅、味等作為初步檢查判斷的手段之一。如藥材樣品折斷后,斷面不油點(diǎn)或擠壓后有油跡者,多含油脂或揮發(fā)油;有粉層的多含淀粉、糖類;嗅之有特殊氣味者,大多含有揮發(fā)油、香豆精、內(nèi)酯;有甜奈者多含糖類;味若者大多含生物堿、甙類、苦味質(zhì);味酸者含有有機(jī)酸;味澀者多含有鞣質(zhì)等等。
    中草藥所含化學(xué)成分均為多類的混合物,分析時(shí)常常互相干擾,不易得到正確結(jié)果。因此需根據(jù)中草藥所含各種化學(xué)成分的溶解度、酸堿度、極性等理化性質(zhì),再用各類成分的鑒別反應(yīng)加以鑒別。
    (一)鑒別注意事項(xiàng)
    1.根據(jù)各灰成分不同性質(zhì),選用適宜的溶劑提取,以保證等成分能被提取出來。
    2.檢品提取液的濃度應(yīng)足以達(dá)到各該反應(yīng)的靈敏度。
    3.檢品提取液的酸堿度(pH)值應(yīng)不致影響鑒別反應(yīng)中所需要的pH值。相差甚大時(shí)應(yīng)事先調(diào)節(jié)。
    4.提取液較深時(shí),常易影響觀察鑒別反應(yīng)的效果,此時(shí)可適當(dāng)稀釋,或進(jìn)一步提純。
    5.鑒別反應(yīng)時(shí)應(yīng)注意防止多類成分的相互干擾,以免出現(xiàn)假陽性,或顏色不正等情況。在化學(xué)鑒別的同時(shí),做空白試驗(yàn)和對照試驗(yàn)(用已知含某類成分的中草藥或純品做陽性對照)。
    6.在鑒別試驗(yàn)中,如果某一類成分的幾個(gè)鑒別反應(yīng)結(jié)果不一致時(shí)(即有的呈陽性反應(yīng),有的呈陰性)則應(yīng)進(jìn)行全面分析。首先應(yīng)注意呈陽性反應(yīng)的試驗(yàn)是否屬于該類成分的專一反應(yīng),否則應(yīng)檢查其他類成分能否產(chǎn)生該反應(yīng),從多方面加以判斷。但也應(yīng)注意,某些反應(yīng)只能對某一類成分中的某個(gè)化學(xué)基團(tuán)呈性反應(yīng),如檢查黃酮類的鹽酸――鎂粉試驗(yàn),它只對黃酮類中的羥基黃酮類(黃酮醇類)反應(yīng)明顯,其余類的黃酮類則不甚明顯,但也不能輕易否定不是黃酮類,為了避免孤立和片面的下結(jié)論,一定要全面考慮綜合分析。
    中草藥化學(xué)成分一般鑒別試驗(yàn)屯只是一個(gè)初步判斷,最后確證尚需進(jìn)一步提純,以鑒定后才能予以肯定。
    (二)鑒別方法
    蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸
    (1)加熱或礦酸試驗(yàn):取檢品的水溶液1ml于試管中,加熱至沸或加5%鹽酸,如發(fā)生混濁或有沉淀示含有水溶性蛋白質(zhì)。
    (2)縮二脲試驗(yàn):取檢品的水溶液1ml,加10%氧化鈉溶液2滴,充分搖勻,逐漸加入硫酸銅試液,隨加搖勻,注意觀察,如呈現(xiàn)紫色或紫紅色示可能含有蛋白質(zhì)和氨基酸。
    凡蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵(-CONH-)者均有此反應(yīng),能在堿性溶液中與Cu2+生成仙絡(luò)合物,呈現(xiàn)一系列的顏色反應(yīng),二肽呈藍(lán)色,三肽呈紫色,加肽以上呈紅色,肽鍵越多顏色越紅。
    (3)茚三酮試驗(yàn),取檢品的水溶液1ml,加入茚三酮試液2-3滴,加熱煮沸4-5分鐘,待其冷卻,呈現(xiàn)紅色棕色或藍(lán)紫色(蛋白質(zhì)、胨類、肽類及氨基酸)。
    α氨基酸與茚三酮的水合作物作用,氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳,而茚三酮被還原成仲醇,與所后成的氨及另一分子茚三酮縮合生成有藍(lán)紫色的化合物。
    【注】①茚三酮試劑主要是多肽和氨基酸的顯色劑,反應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。試劑溶液pH值以5-7為宜,必要時(shí)可加吡啶數(shù)滴或醋酸鈉調(diào)整。
    ②此反應(yīng)非常靈敏,但有個(gè)別氨基酸不能呈紫色,而呈黃色,如脯氨酸。
    (4)氨基酸薄層層析檢出反應(yīng):
    ①吸附劑:硅膠G.
    ②展開劑:(1)正丁醇:水(1:1)(2)正丁醇:醋酸:水(4:1:5)
    ③顯色劑:0.5%茚三酮丙酮溶液,噴霧后于1100烘箱放置5分鐘,顯藍(lán)紫允或紫色。
    2.皂甙
    (1)泡沫試驗(yàn):取檢品的水溶液2ml于帶塞試管中,用力振搖3分鐘,即產(chǎn)生持久性蜂窩狀泡沫(維持10分鐘以上),且泡沫量不少于液體體積的1/3.[醫(yī)學(xué)教 育網(wǎng)搜集整理]
    【注】常用的增溶劑吐溫、司盤,振搖時(shí)均能產(chǎn)生持久性泡沫,要注意區(qū)別。
    (2)溶血試驗(yàn):取試管4支,分別加入濾液0.25、0.5、0.75ml,然后依次分別加入生理鹽水2.25、2.0、1.75、1.5ml,使每一個(gè)試管中的溶液都成為2.5ml,再將各試管加入2%的血細(xì)胞懸液2.5ml,振搖均勻后,同置于370水浴或25-270的室溫中注意觀察溶血情況,一般觀察3小時(shí)即可,或先滴紅細(xì)胞于顯微鏡下,然后滴加檢液看血細(xì)胞是否消失。如有溶血現(xiàn)象示正反應(yīng)。
    【注】①鞣質(zhì)對血紅細(xì)胞有凝集作用,干擾溶血試驗(yàn)的觀察,應(yīng)事先除去(可用取勝酰胺粉吸附或用明膠沉淀)。
    ②檢液應(yīng)為中性溶液。
    (3)醋酐濃硫酸試驗(yàn)(LiebrmannBurchard反應(yīng))取檢品的水溶液置蒸發(fā)皿中,于水浴上蒸干,殘?jiān)尤肷倭勘姿崾谷芙?,再加入醋酐濃硫酸?9:1)試液,呈現(xiàn)紅紫色并變成污色綠色(甾類、三萜類成分或皂甙)
    (4)區(qū)別甾體皂甙和三萜皂甙:取帶塞試管兩支,各盛檢品的水溶解1ml,1支加0.1N鹽酸溶液2ml,另一支加0.1N氫氧化鈉溶液2ml用力振搖1分鐘(需左右手交替振搖各半分鐘),觀察兩管泡沫的多少,若兩管泡沫體積相同或酸管多,示含三萜式皂甙;若加堿管泡沫多于加酸管示含甾示含甾體皂甙。
    三萜皂甙為酸性皂甙在酸性水溶液中形成較穩(wěn)定的泡沫;甾體皂甙為中性皂甙在堿笥溶液中能形成較穩(wěn)定的泡沫。