金銀花的提取 一、金銀花的化學(xué)成分 金銀花除含有綠原酸和異綠原酸外，還含有環(huán)烯醚萜甙裂環(huán)馬錢素、獐牙菜甙、馬錢素、馬錢酸、新環(huán)烯醚萜甙；常春藤皂甙配基、齊墩果酸；川續(xù)斷皂甙乙；黃褐毛忍冬甙甲、α-常春藤皂甙、無患子皂甙B、灰氈毛忍冬皂甙甲、灰氈毛忍冬皂甙乙、灰氈毛忍冬次皂甙甲、灰氈毛忍冬次皂甙乙等。揮發(fā)油主要含芳樟醇、雙花醇、香葉醇、β-苯乙醇、苯甲醇、異雙花醇、α-松油醇、丁香油酚等30多種成分。 傳統(tǒng)經(jīng)驗及近代藥理實驗和臨床應(yīng)用都證明，金銀花對于多種致病菌有較強的抗菌作用和較好的治療效果。 二、綠原酸的提取 金銀花的主要抗菌有效成綠原酸和異綠原酸。它們是奎寧酸和咖啡酸的酯。中藥制劑，制備金銀花提取物多采用水提、水提醇沉和稀醇提取。也有用水煎后加石灰乳使綠原酸類成分沉淀，然后加稀酸分解得提取物的方法。提取方法 ： 1.稀醇提取法 生藥用10倍量和8倍量70%乙醇提取2次，每次2h。提取液過濾，減壓濃縮，抽干?！ ?.水提法 生藥用10倍和8倍量水煎煮2次，每次2h，合并提取液，過濾濃縮至干?！ ?.水提醇沉法 按水提法提取，濃縮至1∶1時，加乙醇至含醇量達75%，靜置，過濾，減壓濃縮抽干?！ ?.超濾方法 稱取干燥金銀花一定量，加入10倍量水沸騰煎煮2次，每次1小時，過濾，擠壓藥渣，合并藥液，離心，量上清液體積。取出1克金銀花的藥液，以測量原液中綠原酸含量?！ ⒋瑸V溶液倒入儲液罐，連接超濾器進行超濾?？刂埔欢ǖ膲毫?，至超濾液的體積占原體積的85%左右時，加入相當(dāng)于原體積15%的水至儲液罐中，繼續(xù)超濾，至超濾液與原體積相同時，取樣(為等體積超濾液)待測含量。往儲液罐中加入相當(dāng)于原來體積25%的水，繼續(xù)超濾，至超濾液相當(dāng)于加入的水量時，取樣(為1.25倍體積超濾液)待測含量。同法繼續(xù)超濾，得到1.5倍、2倍和3倍體積的超濾液。 三、主要有效成分含量的測定方法 1.紫外分光光度法 (1)如新鮮植物中含有多元酚氧化酶，則先在100℃加熱1小時，或浸在1%亞硫酸氫鈉溶液中，然后在石英砂中磨碎，用70%乙醇提取3次(總體積≈10倍樣品)，提取液于40℃-50℃減壓濃縮至原體積的1/10，再用紙層析分離。吸取此液0.01毫升點在whatman No.1濾紙上，用丁醇-甲醇-水(4∶1∶5)的水相蒸氣飽和過夜(20℃)，次日，再用丁醇相下行展開8小時，取出，揮去溶劑后，綠原酸在紫外燈下顯暗藍色熒光，Rf值為0.73，如用氨氣熏則變?yōu)榫G黃色，如噴Hoffners試劑(1%亞硝酸鈉的1%甲醇溶液)，斑點則變?yōu)辄S色，如噴1N氫氧化鈉溶液則變?yōu)榧t色。綠原酸的定量則不噴亞硝酸鈉溶液及氫氧化鈉溶液，可從紙上洗脫，用紫外分光光度計定量?！ ?2)生藥0.5克，用70%乙醇在50℃條件提取(5×10毫升)，取提取液0.2毫升點在濾紙上，于暗處用丁醇-醋酸-乙酸丁酯-水(9∶28∶47∶16)層析18小時，在紫外燈下檢出綠原酸，用70%乙醇10毫升洗脫，在波長324nm處測吸收度?！ ?3)紙層析法，用正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)在19℃展開26小時而分開，斑點用等量10%醋酸溶液及1%亞硝酸鈉溶液噴霧而顯色，綠原酸(黃色)的Rf值為0.50。如用氫氧化鈉溶液噴霧，綠原酸變?yōu)榧t色。綠原酸的定量是將相應(yīng)的斑點用異丙醇或甲醇或水洗脫，在波長327nm測量吸收度?！ ?4)取生藥于60℃烘至恒重，稱取1克，置于瓶中，加95%乙醇25毫升，在80℃水浴上提取1小時。傾出提取液，再加95%乙醇25毫升，重復(fù)提取。合并兩次提取液，稀釋至一定濃度，在波長324nm處測吸收度，用下面公式計算生藥中綠原酸的含量。綠原酸含量%=E×稀釋倍數(shù)K×樣品量(毫克)×100×100% E為吸收度，K為測定常數(shù)。用綠原酸純品測繪標(biāo)準曲線，按E=KCL的公式(C為標(biāo)準液濃度，單位為毫克/100毫升，L為比色杯厚度，1厘米)，求得常數(shù)K為0.479。用此法分析了從各地藥材公司收集的金銀花樣品中綠原酸的含量。 (5)生藥粉1克，用70%甲醇提取24小時(室溫、暗處)或水浴80℃提取1小時，取部分提取液加于含有2克聚酰胺粉的小柱，用水、稀甲醇溶液洗脫柱子，綠原酸可用0.02%氫氧化鈉的70%甲醇溶液洗脫，再用70%甲醇稀釋至一定體積，在波長324nm測吸收度，與標(biāo)準品比較而定量。 2.容量法 (1)碘量法 綠原酸易吸附在wofatit L150上，可從混合物中分離，然后用0.1N鹽酸溶液或稀硫酸洗脫，用碘量法滴定，如用3N氫氧化鈉溶液洗脫則綠原酸被部分地分解成咖啡酸及奎尼酸，但并不影響結(jié)果。 (2)非水滴定 綠原酸在乙腈-甲酸(3∶1)混合液中可被醋酸銅氧化成相應(yīng)的鄰醌(o-quinone)，此反應(yīng)可用于植物樣品中酚類化全物的氧化滴定。