雜環(huán)類藥物的分析
☆ ☆☆☆考點(diǎn)1：異煙肼的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
異煙肼為抗結(jié)核藥，其結(jié)構(gòu)為：
異煙肼結(jié)構(gòu)中吡啶環(huán)上的氮原子具有堿性，可以和某些重金屬離子形成沉淀。γ位上有酰肼基取代，酰肼基有較強(qiáng)的還原性，可以和氨制硝酸銀試液等氧化試劑反應(yīng)，用于鑒別和含量測(cè)定。酰肼基還可以和某些含羰基的試劑發(fā)生縮合反應(yīng)。
2．鑒別
（1）縮合反應(yīng)。異煙肼的酰肼基可以和含羰基的試劑如芳醛發(fā)生縮合反應(yīng)，其中和香草醛的反應(yīng)如下：
異煙肼與香草醛反應(yīng)，生成黃色的異煙腙，干燥后測(cè)定其熔點(diǎn)為228℃～231℃，熔融的同時(shí)分解。《中國(guó)藥典》采用以上反應(yīng)鑒別異煙肼。
（2）還原反應(yīng)。異煙肼的酰肼基具有還原性，可還原硝酸銀中的Ag+成單質(zhì)銀，肼基則被氧化生成氮?dú)狻?BR> 《中國(guó)藥典》的鑒別方法為：取本品約10mg，置試管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸銀試液lml，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。
（3）紅外光譜法。要求本品的紅外吸收光譜與對(duì)照的圖譜一致。
3．游離肼的檢查
異煙肼中的游離肼可由合成時(shí)的原料引入，也可在貯存過(guò)程中降解產(chǎn)生。肼是一種致癌物質(zhì)，必須嚴(yán)格控制其含量。
《中國(guó)藥典》采用薄層色譜法檢查異煙肼原料藥和注射劑中的游離肼。
檢查方法：取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相當(dāng)于游離肼50μg）的溶液，作為對(duì)照溶液。吸取供試品溶液10μl與對(duì)照溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以異丙醇一丙酮（3：2）為展開劑，展開后，晾干，噴以乙醇制對(duì)二甲氨基苯甲醛試液，15分鐘后檢視，在供試品主斑點(diǎn)前方與硫酸肼斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，不得顯黃色斑點(diǎn)。
異煙肼斑點(diǎn)呈棕橙色，R1值約為0.21。游離肼斑點(diǎn)呈鮮黃色，Rf值約為0.3。本法以試驗(yàn)條件下不出現(xiàn)游離肼斑點(diǎn)為合格。肼的檢測(cè)限為0.1μg，控制限量為0.02%。
4．含量測(cè)定
異煙肼分子中的酰肼基具有還原性，可采用氧化還原滴定法測(cè)定其含量?！吨袊?guó)藥典》采用溴酸鉀法測(cè)定，滴定反應(yīng)為：
從以上滴定反應(yīng)可以看出，1mol的溴酸鉀相當(dāng)于3/2mol的異煙肼。
測(cè)定方法：取本品約0.2g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取25ml，加水50ml、鹽酸20ml與甲基橙指示劑1滴，用溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）緩緩滴定（溫度保持在18～25℃）至粉紅色消失。每1ml的溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當(dāng)于3.429mg的C6H7N3O。
使用甲基橙作指示劑，終點(diǎn)時(shí)，溴酸鉀氧化甲基橙使粉紅色消失而指示終點(diǎn)。
每1ml溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當(dāng)于0.025mmol的異煙胼，即相當(dāng)于異煙肼3.429mg（異煙肼的分子量為137.14）。
含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式為：
式中，V--消耗溴酸鉀滴定液的體積，ml；C--溴酸鉀滴定液的濃度，mol/L；W--稱樣量，g。
除原料藥外，異煙肼的片劑、注射劑均采用溴酸鉀法測(cè)定含量。
☆☆☆考點(diǎn)2：尼可剎米的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
尼可剎米為中樞興奮藥，是白色或淡黃色的油狀液體，其結(jié)構(gòu)為：
尼可剎米分子結(jié)構(gòu)中的吡啶環(huán)具有堿性，β位有酰胺基取代，酰胺基在堿性條件下水解，可釋放出二乙胺氣體。
2．鑒別
（1）戊烯二醛反應(yīng)。此反應(yīng)屬吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)。尼可剎米分子中的吡啶環(huán)與溴化氰反應(yīng)，開環(huán)形成戊烯二醛的衍生物，再與苯胺縮合，形成黃色的希夫堿。
《中國(guó)藥典》的鑒別方法為：取本品1滴，加水50ml，搖勻，分取2ml，加溴化氰試液2ml與2.5%苯胺溶液3ml，搖勻，溶液漸顯黃色。
（2）水解反應(yīng)。尼可剎米分子中的酰胺基在堿性條件下可水解，加氫氧化鈉試液，加熱，即有二乙胺逸出，能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變藍(lán)。
（3）沉淀反應(yīng)。尼可剎米分子中的吡啶環(huán)，可以和重金屬離子反應(yīng)。如尼可剎米和硫酸銅及硫氰酸銨作用，生成草綠色配位化合物的沉淀?！吨袊?guó)藥典》收載了此鑒別反應(yīng)。
3．有關(guān)物質(zhì)的檢查
尼可剎米中的有關(guān)物質(zhì)主要是合成的副產(chǎn)物乙基煙酰胺?！吨袊?guó)藥典》采用薄層色譜法檢查。
檢查方法：取供試品，加甲醇制成每1ml中含40mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試品溶液適量，加甲醇稀釋為每1ml中含0.4mg和40μg的溶液，作為對(duì)照溶液（1）和（2），分別吸取以上溶液各10μl，點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上，展開，晾干后，置254nm紫外燈下檢視，供試品溶液中的雜質(zhì)斑點(diǎn)允許有1點(diǎn)超過(guò)對(duì)照溶液（2），但不能超過(guò)對(duì)照溶液（1）的斑點(diǎn)。其余雜質(zhì)斑點(diǎn)均不得超過(guò)對(duì)照溶液（2）的主斑點(diǎn)。
4．含量測(cè)定
（1）非水溶液滴定法。尼可剎米的吡啶環(huán)具有堿性，《中國(guó)藥典》采用非水溶液滴定法測(cè)定尼可剎米原料藥的含量。
測(cè)定方法：取本品約0.15g，精密稱定，加冰醋酸10ml與結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.82mg的C10HN2O。
（2）紫外分光光度法。采用紫外分光光度法測(cè)定尼可剎米注射劑的含量。
測(cè)定方法：用內(nèi)容量移液管精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，用0.5%硫酸溶液分次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入量瓶中，加0.5%硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，加0.5%硫酸溶液稀釋成每1ml中約含尼可剎米20μg的溶液，在263nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按C10H14N2O的吸收系數(shù)（E1%1cm）為292計(jì)算，即得。
注射劑的溶劑對(duì)非水溶液滴定法有干擾，所以采用本法測(cè)定。使用0.5%硫酸溶液溶解樣品，是為了使藥物呈離解狀態(tài)，易溶于水。含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式為：
式上，A--測(cè)定的吸收度值；D--稀釋倍數(shù)。
☆ ☆☆☆考點(diǎn)1：異煙肼的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
異煙肼為抗結(jié)核藥，其結(jié)構(gòu)為：
異煙肼結(jié)構(gòu)中吡啶環(huán)上的氮原子具有堿性，可以和某些重金屬離子形成沉淀。γ位上有酰肼基取代，酰肼基有較強(qiáng)的還原性，可以和氨制硝酸銀試液等氧化試劑反應(yīng)，用于鑒別和含量測(cè)定。酰肼基還可以和某些含羰基的試劑發(fā)生縮合反應(yīng)。
2．鑒別
（1）縮合反應(yīng)。異煙肼的酰肼基可以和含羰基的試劑如芳醛發(fā)生縮合反應(yīng)，其中和香草醛的反應(yīng)如下：
異煙肼與香草醛反應(yīng)，生成黃色的異煙腙，干燥后測(cè)定其熔點(diǎn)為228℃～231℃，熔融的同時(shí)分解。《中國(guó)藥典》采用以上反應(yīng)鑒別異煙肼。
（2）還原反應(yīng)。異煙肼的酰肼基具有還原性，可還原硝酸銀中的Ag+成單質(zhì)銀，肼基則被氧化生成氮?dú)狻?BR> 《中國(guó)藥典》的鑒別方法為：取本品約10mg，置試管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸銀試液lml，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。
（3）紅外光譜法。要求本品的紅外吸收光譜與對(duì)照的圖譜一致。
3．游離肼的檢查
異煙肼中的游離肼可由合成時(shí)的原料引入，也可在貯存過(guò)程中降解產(chǎn)生。肼是一種致癌物質(zhì)，必須嚴(yán)格控制其含量。
《中國(guó)藥典》采用薄層色譜法檢查異煙肼原料藥和注射劑中的游離肼。
檢查方法：取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相當(dāng)于游離肼50μg）的溶液，作為對(duì)照溶液。吸取供試品溶液10μl與對(duì)照溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以異丙醇一丙酮（3：2）為展開劑，展開后，晾干，噴以乙醇制對(duì)二甲氨基苯甲醛試液，15分鐘后檢視，在供試品主斑點(diǎn)前方與硫酸肼斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，不得顯黃色斑點(diǎn)。
異煙肼斑點(diǎn)呈棕橙色，R1值約為0.21。游離肼斑點(diǎn)呈鮮黃色，Rf值約為0.3。本法以試驗(yàn)條件下不出現(xiàn)游離肼斑點(diǎn)為合格。肼的檢測(cè)限為0.1μg，控制限量為0.02%。
4．含量測(cè)定
異煙肼分子中的酰肼基具有還原性，可采用氧化還原滴定法測(cè)定其含量?！吨袊?guó)藥典》采用溴酸鉀法測(cè)定，滴定反應(yīng)為：
從以上滴定反應(yīng)可以看出，1mol的溴酸鉀相當(dāng)于3/2mol的異煙肼。
測(cè)定方法：取本品約0.2g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取25ml，加水50ml、鹽酸20ml與甲基橙指示劑1滴，用溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）緩緩滴定（溫度保持在18～25℃）至粉紅色消失。每1ml的溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當(dāng)于3.429mg的C6H7N3O。
使用甲基橙作指示劑，終點(diǎn)時(shí)，溴酸鉀氧化甲基橙使粉紅色消失而指示終點(diǎn)。
每1ml溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當(dāng)于0.025mmol的異煙胼，即相當(dāng)于異煙肼3.429mg（異煙肼的分子量為137.14）。
含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式為：
式中，V--消耗溴酸鉀滴定液的體積，ml；C--溴酸鉀滴定液的濃度，mol/L；W--稱樣量，g。
除原料藥外，異煙肼的片劑、注射劑均采用溴酸鉀法測(cè)定含量。
☆☆☆考點(diǎn)2：尼可剎米的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
尼可剎米為中樞興奮藥，是白色或淡黃色的油狀液體，其結(jié)構(gòu)為：
尼可剎米分子結(jié)構(gòu)中的吡啶環(huán)具有堿性，β位有酰胺基取代，酰胺基在堿性條件下水解，可釋放出二乙胺氣體。
2．鑒別
（1）戊烯二醛反應(yīng)。此反應(yīng)屬吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)。尼可剎米分子中的吡啶環(huán)與溴化氰反應(yīng)，開環(huán)形成戊烯二醛的衍生物，再與苯胺縮合，形成黃色的希夫堿。
《中國(guó)藥典》的鑒別方法為：取本品1滴，加水50ml，搖勻，分取2ml，加溴化氰試液2ml與2.5%苯胺溶液3ml，搖勻，溶液漸顯黃色。
（2）水解反應(yīng)。尼可剎米分子中的酰胺基在堿性條件下可水解，加氫氧化鈉試液，加熱，即有二乙胺逸出，能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變藍(lán)。
（3）沉淀反應(yīng)。尼可剎米分子中的吡啶環(huán)，可以和重金屬離子反應(yīng)。如尼可剎米和硫酸銅及硫氰酸銨作用，生成草綠色配位化合物的沉淀?！吨袊?guó)藥典》收載了此鑒別反應(yīng)。
3．有關(guān)物質(zhì)的檢查
尼可剎米中的有關(guān)物質(zhì)主要是合成的副產(chǎn)物乙基煙酰胺?！吨袊?guó)藥典》采用薄層色譜法檢查。
檢查方法：取供試品，加甲醇制成每1ml中含40mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試品溶液適量，加甲醇稀釋為每1ml中含0.4mg和40μg的溶液，作為對(duì)照溶液（1）和（2），分別吸取以上溶液各10μl，點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上，展開，晾干后，置254nm紫外燈下檢視，供試品溶液中的雜質(zhì)斑點(diǎn)允許有1點(diǎn)超過(guò)對(duì)照溶液（2），但不能超過(guò)對(duì)照溶液（1）的斑點(diǎn)。其余雜質(zhì)斑點(diǎn)均不得超過(guò)對(duì)照溶液（2）的主斑點(diǎn)。
4．含量測(cè)定
（1）非水溶液滴定法。尼可剎米的吡啶環(huán)具有堿性，《中國(guó)藥典》采用非水溶液滴定法測(cè)定尼可剎米原料藥的含量。
測(cè)定方法：取本品約0.15g，精密稱定，加冰醋酸10ml與結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.82mg的C10HN2O。
（2）紫外分光光度法。采用紫外分光光度法測(cè)定尼可剎米注射劑的含量。
測(cè)定方法：用內(nèi)容量移液管精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，用0.5%硫酸溶液分次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入量瓶中，加0.5%硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，加0.5%硫酸溶液稀釋成每1ml中約含尼可剎米20μg的溶液，在263nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按C10H14N2O的吸收系數(shù)（E1%1cm）為292計(jì)算，即得。
注射劑的溶劑對(duì)非水溶液滴定法有干擾，所以采用本法測(cè)定。使用0.5%硫酸溶液溶解樣品，是為了使藥物呈離解狀態(tài)，易溶于水。含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式為：
式上，A--測(cè)定的吸收度值；D--稀釋倍數(shù)。