生物堿類(lèi)藥物的分析
☆ ☆☆☆☆考點(diǎn)1：鹽酸麻黃堿的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
麻黃堿具有苯羥胺結(jié)構(gòu)，其氮原子在側(cè)鏈上，堿性較強(qiáng)，易與酸成鹽。側(cè)鏈上具有不對(duì)稱(chēng)碳原子，麻黃草中存在的麻黃堿為左旋體，鹽酸麻黃堿的比旋度為-33°～-35.5°。其結(jié)構(gòu)為：
2．鑒別
（1）雙縮脲反應(yīng)。系芳香環(huán)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)的特征反應(yīng)。
鹽酸麻黃堿在堿性溶液中與硫酸銅反應(yīng)，Cu2+與仲胺基形成紫堇色配位化合物，加入乙醚后，無(wú)水銅配位化合物[（C10H15NO）2CuO]及其有2個(gè)結(jié)晶水的銅配位化合物[（C10H15NO）2CuO•2H2O]進(jìn)入醚層，呈紫紅色，具有4個(gè)結(jié)晶水的銅配位化合物[（C10H15NO）2CuO•4H2O]則溶于水層呈藍(lán)色。反應(yīng)式如下：
（2）紅外光譜法。除顯色反應(yīng)外，《中國(guó)藥典》采用紅外光譜法鑒別本品，采用溴化鉀壓片法，主要特征峰如下表：
《中國(guó)藥典》規(guī)定，本品的紅外吸收光譜應(yīng)與對(duì)照品的圖譜一致。
（3）Cl-的反應(yīng)。本品為麻黃堿的鹽酸鹽，其水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)。
3．含量測(cè)定
生物堿類(lèi)藥物一般具有弱堿性，通?？稍诒姿峄虼佐人嵝匀芤褐校酶呗人岬味ㄒ褐苯拥味?，以指示劑或電位法確定終點(diǎn)。
本品為鹽酸鹽，因此滴定前預(yù)先在加入醋酸汞的冰醋酸溶液中，與氫鹵酸生成在冰醋酸中難解離的鹵化汞，從而消除氫鹵酸對(duì)滴定反應(yīng)的不良影響。
測(cè)定方法：取鹽酸麻黃堿約0.15g，精密稱(chēng)定，加冰醋酸10ml，加熱溶解后，加醋酸汞試液4ml與結(jié)品紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯翠綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于20.17mg的C10H15NO•HCl。計(jì)算公式如下：
式中，V和V0--滴定和空白試驗(yàn)時(shí)消耗高氯酸滴定液的體積，ml；C--高氯酸滴定液的濃度，mol/L；W--樣品的稱(chēng)樣量，g。
☆ ☆☆☆考點(diǎn)2：硫酸阿托品的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
阿托品是由托烷衍生的醇（莨菪醇）和莨宕酸縮合而成，具有酯結(jié)構(gòu)。分子結(jié)構(gòu)中，氮原子位于五元脂環(huán)上，故堿性也較強(qiáng)，易與酸成鹽。硫酸阿托品為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，結(jié)構(gòu)中雖具有不對(duì)稱(chēng)碳原子，但為外消旋體，故無(wú)旋光性；酯類(lèi)結(jié)構(gòu)易水解，水解產(chǎn)物可用于鑒別。
2．鑒別
（1）Vitali反應(yīng)。系托烷生物堿的特征反應(yīng)。
硫酸阿托品等托烷類(lèi)藥物均顯莨菪酸結(jié)構(gòu)反應(yīng)，與發(fā)煙硝酸共熱，即得黃色的三硝基（或二硝基）衍生物，冷后，加醇制氫氧化鉀少許，即顯深紫色。若供試品量少，形成紫色不明顯時(shí)，可投入氫氧化鉀顆粒少許，即可在氫氧化鉀表面形成深紫色。反應(yīng)式如下：
（2）紅外光譜法。本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜一致。
（3）SO42-的反應(yīng)。本品為硫酸鹽，水溶液顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng)。照《中國(guó)藥典》附錄“一般鑒別試驗(yàn)”項(xiàng)下“硫酸鹽”的鑒別方法試驗(yàn)。
①取供試品溶液，加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中不溶解。
SO42-與Ba2+反應(yīng)生成：BaSO4的白色沉淀，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。
②取供試品溶液，加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。
SO42-與Pb（Ac）2反應(yīng)生成PbSO4的白色沉淀。
SO42-＋Pb2+→PbSO4↓
PbSO4與Ac-反應(yīng)，生成難離解的Pb（Ac）2而使沉淀溶解。鉛具有兩性，PbSO4遇NaOH可發(fā)生如下的反應(yīng)：
PbSO4＋4OH-→PbO22-＋SO42-＋2H2O
③取供試品溶液，加鹽酸，不生成白色沉淀（與硫代硫酸鹽區(qū)別）。
3．特殊雜質(zhì)的檢查
（1）硫酸阿托品中莨菪堿的檢查。阿托品為莨菪堿的外消旋體，莨菪堿因消旋不完全而引入。莨菪堿具有旋光性，為左旋體，因此規(guī)定檢查的供試品溶液濃度為50mg/ml時(shí)，旋光度不得過(guò)-0.4°。
（2）其他生物堿的檢查。硫酸阿托品制備過(guò)程中可能帶入如莨菪堿、顛茄堿等雜質(zhì)，因此需進(jìn)行檢查。利用其他生物堿堿性弱于阿托品的性質(zhì)，取供試品的鹽酸水溶液，加入氨試液，其他生物堿立即游離，發(fā)生渾濁。方法為：取本品0.25g，加鹽酸溶液1ml溶解后，用水稀釋成15ml，分取5ml，加氨試液2ml，振搖，不得立即發(fā)生渾濁。
4．含量測(cè)定
（1）硫酸阿托品的含量測(cè)定。阿托品具有堿性，《中國(guó)藥典》采用非水溶液滴定法測(cè)定其含量。
測(cè)定方法：取本品約0.5g，精密稱(chēng)定，加冰醋酸與醋酐各10ml溶解后，加結(jié)晶紫指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯純藍(lán)色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于67.68mg的（C17H23NO2）2•H2SO4。
由于硫酸的酸性強(qiáng)，因此生物堿的硫酸鹽在冰醋酸的介質(zhì)中只能被滴定至生物堿的硫酸氫鹽。
（BH+）2•SO42-＋HClO4→BH+•ClO4-＋BH+•HSO4-
1mol的硫酸阿托品消耗1mol的高氯酸，無(wú)水硫酸阿托品的分子量為676.82，所以1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于67.68mg的無(wú)水硫酸阿托品[（C17H23NO2）2•H2SO4]。
（2）硫酸阿托品片的含量測(cè)定。由于片劑的含量很低，輔料對(duì)滴定也可能產(chǎn)生干擾，所以片劑不能使用原料藥的測(cè)定方法?！吨袊?guó)藥典》使用酸性染料比色法測(cè)定硫酸阿托品的含量。藥物在酸性條件下離解為BH+，與酸性染料溴甲酚綠的陰離子In-結(jié)合成離子對(duì)BH•In，用氯仿定量提取后比色測(cè)定。
測(cè)定方法：對(duì)照品溶液的制備：精密量取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品對(duì)照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.05mg的溶液。
供試品溶液的制備：取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于硫酸阿托品2.5mg），置50ml量瓶中，加水振搖使硫酸阿托品溶解并稀釋至刻度，用干燥濾紙濾過(guò)，收集續(xù)濾液，即得。
測(cè)定方法：精密量取以上兩溶液各2ml，分別置于預(yù)先精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液（取溴甲酚綠50mg與鄰苯二甲酸氫鉀1.021g，加0.2mol/l氫氧化鈉溶液6.0ml使溶解，再加水稀釋至100ml，搖勻，必要時(shí)濾過(guò)）2.0ml，振搖提取2分鐘后，靜置使分層，分取澄清的氯仿液，照分光光度法，在420nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，計(jì)算，并將結(jié)果與1.027相乘，即得供試量中含有（C17H23NO3）2•H2SO4•H2O的重量。計(jì)算公式如下：
供試品溶液中硫酸阿托品的濃度為：
CX＝（AX/AR）CR
式中，Cx，CR--供試品溶液和對(duì)照品溶液中硫酸阿托品的濃度，mg/ml；AX，AR--供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度。
式中，W--供試品的稱(chēng)樣量，g； --平均片重，g。
《中國(guó)藥典》中，硫酸阿托品片的含量均勻度、硫酸阿托品注射液也采用酸性染料比色法測(cè)定。
☆ ☆☆☆考點(diǎn)3：硫酸奎寧的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
奎寧為喹啉衍生物，其結(jié)構(gòu)分為喹啉環(huán)和喹核堿兩個(gè)部分，各含一個(gè)氮原子，喹啉環(huán)含芳香族氮，堿性較弱；喹核堿為脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)。其結(jié)構(gòu)如下：
2．鑒別
（1）產(chǎn)生熒光的反應(yīng)。取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10mL，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。
（2）綠奎寧反應(yīng)。系含氧喹啉衍生物的特征反應(yīng)。硫酸奎寧顯綠奎寧反應(yīng)，在藥物的微酸性水溶液中，滴加微過(guò)量的溴水或氯水，再加入過(guò)量的氨溶液，即顯翠綠色。反應(yīng)式如下：
（3）SO42-的鑒別。本品的水溶液顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng)。照《中國(guó)藥典》附錄“一般鑒別試驗(yàn)”中“硫酸鹽”的鑒別方法試驗(yàn)。
（4）紅外光譜法。本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜一致。
3．特殊雜質(zhì)的檢查
（1）氯仿-乙醇中不溶物的檢查?！奥确?乙醇中不溶物”為檢查硫酸奎寧制備過(guò)程中易引入的無(wú)機(jī)鹽與其他生物堿。
檢查方法：取供試品2g，溶于氯仿-無(wú)水乙醇（2：1）混合液中，用稱(chēng)定重量的垂熔坩堝濾過(guò)，不溶物經(jīng)105℃干燥至恒重，遺留殘?jiān)坏眠^(guò)2mg。
（2）其他金雞納堿的檢查。硫酸奎寧制備過(guò)程中可能存在“其他金雞納堿”。采用薄層色譜法進(jìn)行檢查。
檢查方法：取本品，加稀乙醇制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加稀乙醇制成每1ml中含50μg的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-二乙胺（5：4：1.25）為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，微熱使展開(kāi)劑揮散，噴以碘鉑酸鉀試液使顯色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。
以上方法為高低濃度對(duì)比法，限度為0.5%。
4．含量測(cè)定
（1）硫酸奎寧的含量測(cè)定?？鼘幏肿咏Y(jié)構(gòu)中，喹核堿的堿性較強(qiáng)，可以與硫酸成鹽，而喹啉環(huán)的堿性極弱，不能與硫酸成鹽而始終保持游離狀態(tài)。其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式可表示為（QH+）2•SO42-，用高氯酸滴定時(shí)，反應(yīng)為：
從上式可知，1mol的硫酸奎寧可消耗3mol的高氯酸。
測(cè)定方法：取本品約0.2g，精密稱(chēng)定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml與結(jié)晶紫指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于24.9mg的（C20H24N2O2）2•H2SO4。
無(wú)水硫酸奎寧的分子量為746.93，1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于24.90mg的無(wú)水硫酸奎寧[（C20H24N2O2）2•H2SO4]。
（2）硫酸奎寧片的含量測(cè)定。由于片劑的輔料對(duì)測(cè)定有干擾，所以先將適量樣品置于堿性溶液中，使奎寧游離，用氯仿提取后再用非水溶液滴定法滴定。
測(cè)定方法：取本品10片，除去糖衣后，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于硫酸奎寧0.3g），置分液漏斗中，加氯化鈉0.5g與0.1mol/L。氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加氯仿50ml，振搖10分鐘，靜置，分取氯仿液，用干燥濾紙濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5ml與二甲基黃指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于19.57mg的（C20H24N2O2）2•H2SO4•2H2O。
由上述方法可見(jiàn)，硫酸奎寧經(jīng)強(qiáng)堿溶液堿化，生成奎寧游離堿，再與高氯酸反應(yīng)：
（QH+）2•SO42-＋2NaOH→2Q＋Na2SO4＋2H2O
2Q＋4HClO4→2[（QH22+）•（ClO4-）2]
因此，1mol的硫酸奎寧可消耗4mol的高氯酸。硫酸奎寧的分子量為782.96，所以1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于19.57mg的硫酸奎寧[（C20H24N2O2）2•H2SO4•2H2O]。由于方法不相同，片劑分析的滴定度不同于原料藥的滴定度。
☆ ☆☆☆☆考點(diǎn)1：鹽酸麻黃堿的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
麻黃堿具有苯羥胺結(jié)構(gòu)，其氮原子在側(cè)鏈上，堿性較強(qiáng)，易與酸成鹽。側(cè)鏈上具有不對(duì)稱(chēng)碳原子，麻黃草中存在的麻黃堿為左旋體，鹽酸麻黃堿的比旋度為-33°～-35.5°。其結(jié)構(gòu)為：
2．鑒別
（1）雙縮脲反應(yīng)。系芳香環(huán)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)的特征反應(yīng)。
鹽酸麻黃堿在堿性溶液中與硫酸銅反應(yīng)，Cu2+與仲胺基形成紫堇色配位化合物，加入乙醚后，無(wú)水銅配位化合物[（C10H15NO）2CuO]及其有2個(gè)結(jié)晶水的銅配位化合物[（C10H15NO）2CuO•2H2O]進(jìn)入醚層，呈紫紅色，具有4個(gè)結(jié)晶水的銅配位化合物[（C10H15NO）2CuO•4H2O]則溶于水層呈藍(lán)色。反應(yīng)式如下：
（2）紅外光譜法。除顯色反應(yīng)外，《中國(guó)藥典》采用紅外光譜法鑒別本品，采用溴化鉀壓片法，主要特征峰如下表：
《中國(guó)藥典》規(guī)定，本品的紅外吸收光譜應(yīng)與對(duì)照品的圖譜一致。
（3）Cl-的反應(yīng)。本品為麻黃堿的鹽酸鹽，其水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)。
3．含量測(cè)定
生物堿類(lèi)藥物一般具有弱堿性，通?？稍诒姿峄虼佐人嵝匀芤褐校酶呗人岬味ㄒ褐苯拥味?，以指示劑或電位法確定終點(diǎn)。
本品為鹽酸鹽，因此滴定前預(yù)先在加入醋酸汞的冰醋酸溶液中，與氫鹵酸生成在冰醋酸中難解離的鹵化汞，從而消除氫鹵酸對(duì)滴定反應(yīng)的不良影響。
測(cè)定方法：取鹽酸麻黃堿約0.15g，精密稱(chēng)定，加冰醋酸10ml，加熱溶解后，加醋酸汞試液4ml與結(jié)品紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯翠綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于20.17mg的C10H15NO•HCl。計(jì)算公式如下：
式中，V和V0--滴定和空白試驗(yàn)時(shí)消耗高氯酸滴定液的體積，ml；C--高氯酸滴定液的濃度，mol/L；W--樣品的稱(chēng)樣量，g。
☆ ☆☆☆考點(diǎn)2：硫酸阿托品的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
阿托品是由托烷衍生的醇（莨菪醇）和莨宕酸縮合而成，具有酯結(jié)構(gòu)。分子結(jié)構(gòu)中，氮原子位于五元脂環(huán)上，故堿性也較強(qiáng)，易與酸成鹽。硫酸阿托品為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，結(jié)構(gòu)中雖具有不對(duì)稱(chēng)碳原子，但為外消旋體，故無(wú)旋光性；酯類(lèi)結(jié)構(gòu)易水解，水解產(chǎn)物可用于鑒別。
2．鑒別
（1）Vitali反應(yīng)。系托烷生物堿的特征反應(yīng)。
硫酸阿托品等托烷類(lèi)藥物均顯莨菪酸結(jié)構(gòu)反應(yīng)，與發(fā)煙硝酸共熱，即得黃色的三硝基（或二硝基）衍生物，冷后，加醇制氫氧化鉀少許，即顯深紫色。若供試品量少，形成紫色不明顯時(shí)，可投入氫氧化鉀顆粒少許，即可在氫氧化鉀表面形成深紫色。反應(yīng)式如下：
（2）紅外光譜法。本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜一致。
（3）SO42-的反應(yīng)。本品為硫酸鹽，水溶液顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng)。照《中國(guó)藥典》附錄“一般鑒別試驗(yàn)”項(xiàng)下“硫酸鹽”的鑒別方法試驗(yàn)。
①取供試品溶液，加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中不溶解。
SO42-與Ba2+反應(yīng)生成：BaSO4的白色沉淀，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。
②取供試品溶液，加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。
SO42-與Pb（Ac）2反應(yīng)生成PbSO4的白色沉淀。
SO42-＋Pb2+→PbSO4↓
PbSO4與Ac-反應(yīng)，生成難離解的Pb（Ac）2而使沉淀溶解。鉛具有兩性，PbSO4遇NaOH可發(fā)生如下的反應(yīng)：
PbSO4＋4OH-→PbO22-＋SO42-＋2H2O
③取供試品溶液，加鹽酸，不生成白色沉淀（與硫代硫酸鹽區(qū)別）。
3．特殊雜質(zhì)的檢查
（1）硫酸阿托品中莨菪堿的檢查。阿托品為莨菪堿的外消旋體，莨菪堿因消旋不完全而引入。莨菪堿具有旋光性，為左旋體，因此規(guī)定檢查的供試品溶液濃度為50mg/ml時(shí)，旋光度不得過(guò)-0.4°。
（2）其他生物堿的檢查。硫酸阿托品制備過(guò)程中可能帶入如莨菪堿、顛茄堿等雜質(zhì)，因此需進(jìn)行檢查。利用其他生物堿堿性弱于阿托品的性質(zhì)，取供試品的鹽酸水溶液，加入氨試液，其他生物堿立即游離，發(fā)生渾濁。方法為：取本品0.25g，加鹽酸溶液1ml溶解后，用水稀釋成15ml，分取5ml，加氨試液2ml，振搖，不得立即發(fā)生渾濁。
4．含量測(cè)定
（1）硫酸阿托品的含量測(cè)定。阿托品具有堿性，《中國(guó)藥典》采用非水溶液滴定法測(cè)定其含量。
測(cè)定方法：取本品約0.5g，精密稱(chēng)定，加冰醋酸與醋酐各10ml溶解后，加結(jié)晶紫指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯純藍(lán)色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于67.68mg的（C17H23NO2）2•H2SO4。
由于硫酸的酸性強(qiáng)，因此生物堿的硫酸鹽在冰醋酸的介質(zhì)中只能被滴定至生物堿的硫酸氫鹽。
（BH+）2•SO42-＋HClO4→BH+•ClO4-＋BH+•HSO4-
1mol的硫酸阿托品消耗1mol的高氯酸，無(wú)水硫酸阿托品的分子量為676.82，所以1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于67.68mg的無(wú)水硫酸阿托品[（C17H23NO2）2•H2SO4]。
（2）硫酸阿托品片的含量測(cè)定。由于片劑的含量很低，輔料對(duì)滴定也可能產(chǎn)生干擾，所以片劑不能使用原料藥的測(cè)定方法?！吨袊?guó)藥典》使用酸性染料比色法測(cè)定硫酸阿托品的含量。藥物在酸性條件下離解為BH+，與酸性染料溴甲酚綠的陰離子In-結(jié)合成離子對(duì)BH•In，用氯仿定量提取后比色測(cè)定。
測(cè)定方法：對(duì)照品溶液的制備：精密量取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品對(duì)照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.05mg的溶液。
供試品溶液的制備：取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于硫酸阿托品2.5mg），置50ml量瓶中，加水振搖使硫酸阿托品溶解并稀釋至刻度，用干燥濾紙濾過(guò)，收集續(xù)濾液，即得。
測(cè)定方法：精密量取以上兩溶液各2ml，分別置于預(yù)先精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液（取溴甲酚綠50mg與鄰苯二甲酸氫鉀1.021g，加0.2mol/l氫氧化鈉溶液6.0ml使溶解，再加水稀釋至100ml，搖勻，必要時(shí)濾過(guò)）2.0ml，振搖提取2分鐘后，靜置使分層，分取澄清的氯仿液，照分光光度法，在420nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，計(jì)算，并將結(jié)果與1.027相乘，即得供試量中含有（C17H23NO3）2•H2SO4•H2O的重量。計(jì)算公式如下：
供試品溶液中硫酸阿托品的濃度為：
CX＝（AX/AR）CR
式中，Cx，CR--供試品溶液和對(duì)照品溶液中硫酸阿托品的濃度，mg/ml；AX，AR--供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度。
式中，W--供試品的稱(chēng)樣量，g； --平均片重，g。
《中國(guó)藥典》中，硫酸阿托品片的含量均勻度、硫酸阿托品注射液也采用酸性染料比色法測(cè)定。
☆ ☆☆☆考點(diǎn)3：硫酸奎寧的分析
1．結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
奎寧為喹啉衍生物，其結(jié)構(gòu)分為喹啉環(huán)和喹核堿兩個(gè)部分，各含一個(gè)氮原子，喹啉環(huán)含芳香族氮，堿性較弱；喹核堿為脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)。其結(jié)構(gòu)如下：
2．鑒別
（1）產(chǎn)生熒光的反應(yīng)。取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10mL，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。
（2）綠奎寧反應(yīng)。系含氧喹啉衍生物的特征反應(yīng)。硫酸奎寧顯綠奎寧反應(yīng)，在藥物的微酸性水溶液中，滴加微過(guò)量的溴水或氯水，再加入過(guò)量的氨溶液，即顯翠綠色。反應(yīng)式如下：
（3）SO42-的鑒別。本品的水溶液顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng)。照《中國(guó)藥典》附錄“一般鑒別試驗(yàn)”中“硫酸鹽”的鑒別方法試驗(yàn)。
（4）紅外光譜法。本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜一致。
3．特殊雜質(zhì)的檢查
（1）氯仿-乙醇中不溶物的檢查?！奥确?乙醇中不溶物”為檢查硫酸奎寧制備過(guò)程中易引入的無(wú)機(jī)鹽與其他生物堿。
檢查方法：取供試品2g，溶于氯仿-無(wú)水乙醇（2：1）混合液中，用稱(chēng)定重量的垂熔坩堝濾過(guò)，不溶物經(jīng)105℃干燥至恒重，遺留殘?jiān)坏眠^(guò)2mg。
（2）其他金雞納堿的檢查。硫酸奎寧制備過(guò)程中可能存在“其他金雞納堿”。采用薄層色譜法進(jìn)行檢查。
檢查方法：取本品，加稀乙醇制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加稀乙醇制成每1ml中含50μg的溶液，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-二乙胺（5：4：1.25）為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，微熱使展開(kāi)劑揮散，噴以碘鉑酸鉀試液使顯色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。
以上方法為高低濃度對(duì)比法，限度為0.5%。
4．含量測(cè)定
（1）硫酸奎寧的含量測(cè)定?？鼘幏肿咏Y(jié)構(gòu)中，喹核堿的堿性較強(qiáng)，可以與硫酸成鹽，而喹啉環(huán)的堿性極弱，不能與硫酸成鹽而始終保持游離狀態(tài)。其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式可表示為（QH+）2•SO42-，用高氯酸滴定時(shí)，反應(yīng)為：
從上式可知，1mol的硫酸奎寧可消耗3mol的高氯酸。
測(cè)定方法：取本品約0.2g，精密稱(chēng)定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml與結(jié)晶紫指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于24.9mg的（C20H24N2O2）2•H2SO4。
無(wú)水硫酸奎寧的分子量為746.93，1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于24.90mg的無(wú)水硫酸奎寧[（C20H24N2O2）2•H2SO4]。
（2）硫酸奎寧片的含量測(cè)定。由于片劑的輔料對(duì)測(cè)定有干擾，所以先將適量樣品置于堿性溶液中，使奎寧游離，用氯仿提取后再用非水溶液滴定法滴定。
測(cè)定方法：取本品10片，除去糖衣后，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于硫酸奎寧0.3g），置分液漏斗中，加氯化鈉0.5g與0.1mol/L。氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加氯仿50ml，振搖10分鐘，靜置，分取氯仿液，用干燥濾紙濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5ml與二甲基黃指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于19.57mg的（C20H24N2O2）2•H2SO4•2H2O。
由上述方法可見(jiàn)，硫酸奎寧經(jīng)強(qiáng)堿溶液堿化，生成奎寧游離堿，再與高氯酸反應(yīng)：
（QH+）2•SO42-＋2NaOH→2Q＋Na2SO4＋2H2O
2Q＋4HClO4→2[（QH22+）•（ClO4-）2]
因此，1mol的硫酸奎寧可消耗4mol的高氯酸。硫酸奎寧的分子量為782.96，所以1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于19.57mg的硫酸奎寧[（C20H24N2O2）2•H2SO4•2H2O]。由于方法不相同，片劑分析的滴定度不同于原料藥的滴定度。