病原學(xué)檢查
1.痰涂片顯微鏡檢查
痰標(biāo)本涂片萋一尼染色找抗酸桿菌具有快速、簡便等優(yōu)點。厚涂片可提高檢測陽性率。熒光染色檢查不需油鏡,視野范圍廣,敏感性高于抗酸染色,但易有假陽性。
抗酸染色直接鏡檢不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌(nontubercu1ous mycobacteria),但在我國非結(jié)核分枝桿菌病相對較少,涂片找到抗酸桿菌絕大多數(shù)為結(jié)核桿菌,可以提示診斷。規(guī)定觀察300個視野,油鏡下所見判斷檢驗結(jié)果標(biāo)準(zhǔn):0條/300視野(陰性);1-2條/300視野(可疑陽性);3~9條/100視野(+);1~9條/10視野(++);1~9條/視野(+++);≥10條/視野(++++)。除了痰標(biāo)本外,膿液、病灶組織、纖支鏡刷檢物、沖洗或灌洗液均可用于直接涂片檢查。
2.結(jié)核菌培養(yǎng)
結(jié)核菌培養(yǎng)法具有很高敏感性和特異性。培養(yǎng)后可進(jìn)行藥敏測試。隨著耐多藥結(jié)核菌增多,藥敏愈顯重要。近來應(yīng)用BacteeTB460系統(tǒng),在含放射性14 C棕櫚酸底物的Th.分枝桿菌培養(yǎng)基,由于分枝桿菌產(chǎn)生帶有放射性14C,進(jìn)行測定和推算。新的Bactee MGIT960系統(tǒng)以熒光素取代14C,可以避免核素污染。Bactec TB系統(tǒng)培養(yǎng)結(jié)核菌陽性報告時間較普通培養(yǎng)縮短10天左右,藥敏通常在培養(yǎng)陽性后的4~6天即可完成,且能快速將結(jié)核菌和非結(jié)核分枝桿菌加以鑒別。
3.分子生物學(xué)檢測
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)可以將標(biāo)本中微量的結(jié)核菌DNA加以擴增。一般鏡檢僅能檢測104~105條菌/毫升,而PCR可檢出1-100fg結(jié)核菌DNA(相當(dāng)于1~20條菌/毫升)。但DNA提取過程遭遇污染等技術(shù)原因可以出現(xiàn)假陽性,而且PCR無法區(qū)別活菌和死菌,故不能用于結(jié)核病治療效果評估、流行病學(xué)調(diào)查等。目前PCR檢測僅推薦在非結(jié)核分枝桿菌病高發(fā)地區(qū)涂片抗酸桿菌陽性病例用來快速區(qū)分結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌。已有商用結(jié)核菌eDNA探針,由于實驗操作復(fù)雜等原因尚未在臨床上應(yīng)用。核酸指印技術(shù)(eDNA finger printing)采用限制性內(nèi)切酶片段多態(tài)性分析(restriction fragment 1ength po1ymorphism,RP1P),可用于鑒定所分離到的結(jié)核菌是否同源,用于流行病研究。
4.結(jié)核菌
抗原和抗體檢測采用E1ISA方法檢測痰標(biāo)本中結(jié)核菌抗原的結(jié)果差異甚大,可能與痰標(biāo)本中結(jié)核菌抗原分布不甚均勻有關(guān)。采用不同的抗原檢測肺結(jié)核患者血標(biāo)本中結(jié)核菌IgG的敏感性為24%-100%不等,特異性為71%-100%。我國采用PPD作為抗原檢測結(jié)核菌IgG,敏感性和特異性分別為60%-80%和90%,抗體檢測主要是用于臨床和X線影像學(xué)疑為肺結(jié)核而不易獲得痰標(biāo)本的兒童及痰涂陰性肺結(jié)核患者的診斷參考。
1.痰涂片顯微鏡檢查
痰標(biāo)本涂片萋一尼染色找抗酸桿菌具有快速、簡便等優(yōu)點。厚涂片可提高檢測陽性率。熒光染色檢查不需油鏡,視野范圍廣,敏感性高于抗酸染色,但易有假陽性。
抗酸染色直接鏡檢不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌(nontubercu1ous mycobacteria),但在我國非結(jié)核分枝桿菌病相對較少,涂片找到抗酸桿菌絕大多數(shù)為結(jié)核桿菌,可以提示診斷。規(guī)定觀察300個視野,油鏡下所見判斷檢驗結(jié)果標(biāo)準(zhǔn):0條/300視野(陰性);1-2條/300視野(可疑陽性);3~9條/100視野(+);1~9條/10視野(++);1~9條/視野(+++);≥10條/視野(++++)。除了痰標(biāo)本外,膿液、病灶組織、纖支鏡刷檢物、沖洗或灌洗液均可用于直接涂片檢查。
2.結(jié)核菌培養(yǎng)
結(jié)核菌培養(yǎng)法具有很高敏感性和特異性。培養(yǎng)后可進(jìn)行藥敏測試。隨著耐多藥結(jié)核菌增多,藥敏愈顯重要。近來應(yīng)用BacteeTB460系統(tǒng),在含放射性14 C棕櫚酸底物的Th.分枝桿菌培養(yǎng)基,由于分枝桿菌產(chǎn)生帶有放射性14C,進(jìn)行測定和推算。新的Bactee MGIT960系統(tǒng)以熒光素取代14C,可以避免核素污染。Bactec TB系統(tǒng)培養(yǎng)結(jié)核菌陽性報告時間較普通培養(yǎng)縮短10天左右,藥敏通常在培養(yǎng)陽性后的4~6天即可完成,且能快速將結(jié)核菌和非結(jié)核分枝桿菌加以鑒別。
3.分子生物學(xué)檢測
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)可以將標(biāo)本中微量的結(jié)核菌DNA加以擴增。一般鏡檢僅能檢測104~105條菌/毫升,而PCR可檢出1-100fg結(jié)核菌DNA(相當(dāng)于1~20條菌/毫升)。但DNA提取過程遭遇污染等技術(shù)原因可以出現(xiàn)假陽性,而且PCR無法區(qū)別活菌和死菌,故不能用于結(jié)核病治療效果評估、流行病學(xué)調(diào)查等。目前PCR檢測僅推薦在非結(jié)核分枝桿菌病高發(fā)地區(qū)涂片抗酸桿菌陽性病例用來快速區(qū)分結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌。已有商用結(jié)核菌eDNA探針,由于實驗操作復(fù)雜等原因尚未在臨床上應(yīng)用。核酸指印技術(shù)(eDNA finger printing)采用限制性內(nèi)切酶片段多態(tài)性分析(restriction fragment 1ength po1ymorphism,RP1P),可用于鑒定所分離到的結(jié)核菌是否同源,用于流行病研究。
4.結(jié)核菌
抗原和抗體檢測采用E1ISA方法檢測痰標(biāo)本中結(jié)核菌抗原的結(jié)果差異甚大,可能與痰標(biāo)本中結(jié)核菌抗原分布不甚均勻有關(guān)。采用不同的抗原檢測肺結(jié)核患者血標(biāo)本中結(jié)核菌IgG的敏感性為24%-100%不等,特異性為71%-100%。我國采用PPD作為抗原檢測結(jié)核菌IgG,敏感性和特異性分別為60%-80%和90%,抗體檢測主要是用于臨床和X線影像學(xué)疑為肺結(jié)核而不易獲得痰標(biāo)本的兒童及痰涂陰性肺結(jié)核患者的診斷參考。