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2018年執(zhí)業(yè)藥師考試藥學(xué)專業(yè)知識(shí)一筆記(12)
雜質(zhì)的去除方法是什么
酶提取液中常含有雜蛋白、多糖、脂類及核酸等雜質(zhì),可用下述方法去除:
調(diào)PH和加熱法:利用蛋白質(zhì)對(duì)酸、堿和熱變性方面性質(zhì)的差異,可去除非活性雜蛋白。如制備脂肪酶時(shí),在pH3、4時(shí)以400C溫度加熱150 min,淀粉酶活力可喪失90%而被除去,而脂肪酶活力仍保持80%以上。
蛋白質(zhì)表面變性法:蛋白質(zhì)表面變性后其性質(zhì)有所不同,借以去除雜蛋白。如制備過(guò)氧化氫酶時(shí),加入氯仿和乙醇進(jìn)行振蕩可以將雜蛋白變性而去除。
蛋白質(zhì)沉淀劑法:利用醋酸鋁、利凡諾、單寧酸、離子型表面活性劑等蛋白質(zhì)沉淀劑可以去除雜蛋白及粘多糖類雜質(zhì)。使用時(shí)要注意這類試劑?？梢鹈缸冃允Щ?因此應(yīng)迅速除去。
選擇性變性法:各種蛋白質(zhì)對(duì)變性劑的穩(wěn)定性不同,可以用選擇性變性劑去除雜蛋白。如細(xì)胞色素丙對(duì)三氯醋酸較穩(wěn)定,所以在制備時(shí)可用2.5%三氯醋酸使其他雜蛋白變性使沉淀除去。
加保護(hù)劑熱變性法:酶與底物或競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑結(jié)合后,其穩(wěn)定性常顯著增加。所以常用它們?yōu)楸Ｗo(hù)劑,再用一些劇烈手段破壞雜蛋白,如用D-甲基苯甲酸為D-氨基酸氧化酶的保護(hù)劑,經(jīng)加熱除去雜蛋白,使該酶得到很好的提純。
核酸沉淀劑法:酶液中的核酸類雜質(zhì),可以用氯化錳、魚精蛋白硫酸鹽等沉淀劑使其沉淀而除去。必要時(shí),也可用核糖核酶將核酸降解后除去。