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第二節(jié) 熒光分析法
了解熒光分析法的基本原理和應(yīng)用;熒光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)。
一、基本原理
熒光的產(chǎn)生：此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲(chǔ)存能量(如光能、化學(xué)能等)而進(jìn)入激發(fā)態(tài)，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時(shí)，過(guò)剩的能量可以電磁輻射的形式放射(即發(fā)光)。熒光發(fā)射的特點(diǎn)是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光;而一旦停止供能，發(fā)光(熒光)現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失。
發(fā)射熒光的光量子數(shù)亦即熒光強(qiáng)度，除受激發(fā)光強(qiáng)度影響外，也與激發(fā)光的波長(zhǎng)有關(guān)。各個(gè)熒光分子有其特定的吸收光譜和發(fā)射光譜(熒光光譜)，即在某一特定波長(zhǎng)處有最大吸收峰和最大發(fā)射峰。選擇激發(fā)光波長(zhǎng)量接近于熒光分子的最大吸收峰波長(zhǎng)，且測(cè)定光波量接近于最大發(fā)射光波峰時(shí)，得到的熒光強(qiáng)度也最大。
物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可以用作該物質(zhì)的定性分析。當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長(zhǎng)、所用溶劑及溫度等條件固定時(shí)，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其發(fā)射光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會(huì)有“自熄滅”作用，故熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行。
二、熒光分光光度計(jì)
激發(fā)光源→激發(fā)光單色器→樣品池
↓
發(fā)射光單色器→檢測(cè)器→數(shù)據(jù)記錄處理
樣品池用低熒光材料制成，四面透光，發(fā)射光方向與激發(fā)光成直角。
三、應(yīng)用：熒光分析可用于鑒別和含量測(cè)定。一般采用對(duì)照品比較法測(cè)定含量，靈敏度高、選擇性好，但干擾多、線性范圍窄，多用于需要高靈敏度和允許較大變異性的樣品分析。
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